[发明专利]一种检测沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的方法

权利要求书

1.一种检测沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的方法，该方法包括以下步骤：

(1)将待测样品与液体培养基混合，并将混合物置于能够使待测样品中可能存在的细菌扩增的条件下进行培养，获得扩增后的样品；

(2)利用免疫磁珠捕获扩增后的样品中可能存在的沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌，所述免疫磁珠由抗体与磁球偶联得到；

(3)提取步骤(1)中捕获的菌体的基因组DNA；

(4)采用针对沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的特异性引物对提取到的基因组DNA进行多重荧光定量PCR，根据多重荧光定量PCR的结果确定待测样品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗体包括沙门氏菌多克隆抗体、志贺氏菌多克隆抗体和金黄色葡萄球菌多克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述磁球的粒径为150-200nm。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，相对于每毫克的磁球，所述抗体的用量≥0.1mg。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，相对于每毫升的扩增后的样品，以磁球的重量计，所述免疫磁珠的用量为0.5-5μg。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，捕获的条件包括：温度为35-38℃，时间为25-35min。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多重荧光定量PCR为三重荧光定量PCR，所述特异性引物为能够特异地扩增沙门氏菌的NA^a基因、志贺氏菌的ipaH基因和金黄色葡萄球菌的Sa442基因的引物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，多重荧光定量PCR所使用的上游引物、下游引物以及相应的特异性荧光探针的核苷酸序列如下：

上游引物1如SEQIDNO：1所示，下游引物1如SEQIDNO：2所示，特异性荧光探针1如SEQIDNO：7所示；

上游引物2如SEQIDNO：3所示，下游引物2如SEQIDNO：4所示，特异性荧光探针2如SEQIDNO：8所示；

上游引物3如SEQIDNO：5所示，下游引物3如SEQIDNO：6所示，特异性荧光探针3如SEQIDNO：9所示。

9.根据权利要求1、7或8所述的方法，其中，多重荧光定量PCR的条件包括：94-96℃预变性18-22s；94-96℃变性2.5-3.5s；58-62℃退火和延伸28-32s；38-42个循环。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，扩增后的样品中沙门氏菌的浓度≥2CFU/g，志贺氏菌的浓度≥6.8CFU/g，金黄色葡萄球菌的浓度≥9.6CFU/g。