[发明专利]一种青春双歧杆菌细菌素及其生产方法与专用生产菌株

说明书

技术领域

本发明涉及一种青春双歧杆菌细菌素及其生产方法与专用生产菌株，属于食品生物技术领域。

背景技术

食品在加工运输储藏的过程中极易受到微生物污染腐败变质进而引发各种食品安全事件，开发新型绿色食品防腐保鲜剂是当今食品工业急需解决的重要问题之一，近年来无毒、无副作用、无耐药性、可在人体内降解的天然微生物防腐剂的出现为解决该问题提供了一个新思路。

乳酸菌细菌素是乳酸菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的具有抑菌活性的多肽或蛋白类物质，可抑制或杀死部分食品腐败菌和致病菌的生长，具有耐受一定热和酸碱以及在人体内可降解、无毒无残留的特点。此外，将乳酸菌细菌素的产生菌株添加到食品中，还可以改善发酵产品的感官品质和功能性。这些都显示出乳酸菌细菌素及其产生菌作为天然生物防腐剂在食品工业中的巨大应用前景。

双歧杆菌是乳酸菌的一个重要分支，因其调节肠道平衡，提高免疫力等众多生理功能受到大众的关注，被广泛添加到食品和药物制剂中，可改善产品品质及功能特性，抗菌消炎，提高人体免疫力等。业已发现，极少数双歧杆菌属菌株也可产生细菌素，如两歧双歧杆菌(B.bifidum)NCFB1454、嗜热双歧杆菌(B.thermophilum)RBL67、婴儿双歧杆菌(B.infants)BCRC14602等。截至目前，国内外还未见有产细菌素青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)的报道。

双歧杆菌是人体肠道健康的重要指标，在食品工业中也占有重要地位，其所产细菌素也越来越受到人们的重视，必将成为天然食品生物防腐剂的开发热点。

发明内容

本发明的目的是提供一株具有广谱抑菌效果的产细菌素双歧杆菌。

本发明所提供的双歧杆菌，是青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)BL-8，已于2013年06月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为：CGMCC№.7791。

本发明的第二个目的是提供一种双歧杆菌细菌素及其生产方法。

本发明所提供的双歧杆菌细菌素，是发酵青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)BL-8CGMCC№.7791得到的细菌素。

所述方法中，用于培养青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)BL-8CGMCC№.7791的培养基优选组成为：乳糖2％、胰蛋白胨2％、牛肉膏1％、酵母膏0.5％、磷酸氢二钾0.2％、柠檬酸二胺0.2％、乙酸钠0.5％、吐温80 0.1％、七水合硫酸镁0.058％、硫酸锰0.025％、玉米浆0.35％、L-半胱氨酸盐酸0.035％，pH6.5，所述百分数均为质量百分比。

所述方法中，用于培养青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)BL-8CGMCC№.7791的培养时间优选为32h，培养基起始pH值优选为6.5，培养温度优选为37℃。

所述方法中，得到的细菌素可按照以下步骤进行纯化：首先采用60-80％硫酸铵饱和度从发酵液中盐析提取细菌素粗品；进一步通过凝胶过滤层析及阳离子交换树脂层析纯化，最后经冷冻干燥得到细菌素纯品。

其中，上述硫酸铵沉淀法的最佳硫酸铵饱和度为80％。

上述凝胶过滤层析以Sephadex G-25为凝胶填料，流速0.5mL/min，收集保留时间为72-80min的蛋白峰为细菌素活性峰。

上述阳离子交换树脂层析以SP Sepharose Fast Flow为凝胶填料，用pH5.5含0-1M NaCl的0.02M醋酸缓冲液在60min内进行线性梯度洗脱，流速0.8mL/min，收集保留时间为8-18min的蛋白峰为细菌素活性峰。

上述纯化得到的细菌素分子量为829.23Da。

上述方法得到的双歧杆菌细菌素也属于本发明的保护范围。

本发明的青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)BL-8CGMCC№.7791是一种产细菌素的青春双歧杆菌，该细菌素是一种新型双歧杆菌细菌素，其具有良好的食品加工特性和安全性，抑菌谱广，可用于天然食品生物防腐剂的开发。

附图说明

图1为细菌素的凝胶过滤层析洗脱曲线图。