[发明专利]一种青春双歧杆菌细菌素及其生产方法与专用生产菌株

权利要求书

1.青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)BL-8，其特征在于，所述的青春双歧杆菌BL-8保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为BL-8 CGMCC No.7791。

2.一种生产青春双歧杆菌细菌素的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)发酵权利要求1所述的青春双歧杆菌；

(2)从发酵液中提取并纯化所述青春双歧杆菌细菌素；

所述发酵的培养基组成为：乳糖2％、胰蛋白胨2％、牛肉膏1％、酵母膏0.5％、磷酸氢二钾0.2％、柠檬酸二胺0.2％、乙酸钠0.5％、吐温80 0.1％、七水合硫酸镁0.058％、硫酸锰0.025％、玉米浆0.35％、L-半胱氨酸盐酸0.035％，pH6.5，所述百分数均为质量百分比。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于：发酵所述青春双歧杆菌的温度为37℃，培养时间为32h。

4.根据权利要求2或3任一所述的方法，其特征在于，所述的提取并纯化的步骤为：

(1)采用60-80％饱和度硫酸铵从发酵液中盐析提取细菌素粗品；

(2)通过凝胶过滤层析或阳离子交换树脂层析纯化，并经冷冻干燥得到所述青春双歧杆菌细菌素纯品。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于：所述硫酸铵饱和度为80％。

6.根据权利要求4所述方法，其特征在于：所述凝胶过滤层析的方法参数为：以Sephadex G-25为凝胶填料，流速0.5mL/min，收集保留时间为72-80min的蛋白峰，即得所述青春双歧杆菌细菌素溶液。

7.根据权利要求4所述方法，其特征在于：所述阳离子交换树脂层析的方法参数为：以SP Sepharose Fast Flow为凝胶填料，用pH5.5的含0-1M NaCl的0.02M醋酸缓冲液在60min内进行线性梯度洗脱，流速0.8mL/min，收集保留时间为8-18min的蛋白峰，即得所述青春双歧杆菌细菌素溶液。

8.根据权利要求4所述方法，其特征在于：纯化后得到的青春双歧杆菌细菌素分子量为829.23Da。