[发明专利]巨大戟醇提取物的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及巨大戟醇提取物的分离纯化方法，属于中药提取分离领域。

背景技术

巨大戟醇(ingenol)是一种四环二萜类天然产物，其结构式如式Ⅰ所示，来源于大戟科大戟属植物，以其为母核的衍生物表现出较好的抗癌、抗HIV等生物活性，其中以巨大戟醇-3-当归酸酯为分子实体的新药Picato已于2012年被FDA批准上市，用于光化性角化病的治疗。

巨大戟醇结构新奇复杂，在过去的30多年里，其独特的结构和活性虽然引起了众多化学家的关注，也有相关全合成的报道，但合成路线大多步骤繁琐，得率低，难以适应日益增长的市场需求；LEO Pharma公司与Scripps Research Institute合作[Science341,878(2013)]，由(+)-3-蒈烯通过14步最终合成得到巨大戟醇，总收率达到1.2％，但其合成路线仍然处于实验室阶段，且合成过程中需要用到剧毒试剂四氧化锇和二氧化硒，该工艺用于放大生产还有待进一步验证。

目前市场上，巨大戟醇仍然主要来源于大戟科植物的提取分离。

中国专利CN 102126941A对提取浸膏采用萃取、反萃取、碱水解、调pH、减压浓缩，然后对浓缩后的浸膏采用硅胶柱层析，结合重结晶手段纯化得到高纯度的巨大戟醇，该方法前期有多次萃取操作，耗时长，转移率低，损失较大，且用到价格昂贵的有毒性的萃取试剂乙腈，成本高，不利于环保，也不适合规模化生产，而且硅胶柱层析采用了石油醚/乙酸乙酯(1:1)洗脱除杂，然后加入乙酸乙酯洗脱，在除杂的过程中由于乙酸乙酯的加入会将部分巨大戟醇化合物带出，降低产率。

专利CN 103694096A对提取浸膏同样采用了萃取操作，萃取物浓缩后先后经过硅胶柱层析和制备液相纯化，最终得到高纯度的巨大戟醇单体，由于千金子药材中巨大戟醇主要以其酯类衍生物形式存在，该纯化工艺未采用水解步骤，因而最终产品收率极低，难以满足规模化生产要求。

专利WO 2013050365 A1中对千金子药材粉末直接加碱搅拌水解，中和后再依次用石油醚和四氢呋喃萃取，然后采用硅胶柱层析纯化得到高纯度的巨大戟醇，该方法虽简化了纯化步骤，但因其用药材粉末直接加碱搅拌水解，无法保证药材里的巨大戟醇衍生物都能浸提出来并水解完全。

上述专利均采用了多步萃取操作，因千金子中富含油类成分，萃取时容易乳化，需大量溶剂多次萃取才能将目标成分萃取完全，萃取效率低，导致提取率低；萃取所用萃取剂石油醚沸点低，减压浓缩回收率低，也在一定程度上增加了生产成本；而且现有技术中柱层析大多采用石油醚和乙酸乙酯混合洗脱剂洗脱，虽然能够有效的除去极性小的杂质，由于混合洗脱剂中乙酸乙酯的加入，目标化合物巨大戟醇也会随着杂质被带出，降低了生产产率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供巨大戟醇提取物的分离纯化方法。

本发明的技术方案：巨大戟醇提取物的分离纯化方法，包括如下步骤：

a、将巨大戟醇提取物加碱水解后，加酸中和，然后浓缩得到膏状物；

b、将步骤a得到的膏状物在硅胶柱层析装置中进行分离纯化，所述硅胶柱层析装置包括层析柱A和层析柱B，层析柱A和层析柱B之间采用三通阀进行连接；硅胶柱层析具体操作如下：调节三通阀，将层析柱A和层析柱B断开连接，在层析柱A中上样，然后，层析柱A采用石油醚洗脱除杂，调节三通阀，使层析柱A和层析柱B连接，向层析柱A中加入乙酸乙酯洗脱，收集巨大戟醇-乙酸乙酯混合液；

c、将步骤b得到的巨大戟醇-乙酸乙酯混合液减压浓缩后，静置析出，过滤得到巨大戟醇。

进一步地，优选步骤a中所述巨大戟醇提取物为大戟科大戟属植物药材采用提取溶剂提取得到；所述提取溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙醚或氯仿。

进一步地，优选步骤a中所述巨大戟醇提取物的制备方法如下：取大戟科大戟属植物药材，粉碎或切段，按料液比1:5～20w/v加入提取溶剂进行回流提取，提取1～4次，每次0.5～2小时，合并提取液，减压浓缩得巨大戟醇提取物。其中，w/v的单位为kg/L。

进一步地，优选所述大戟科大戟属植物为甘遂、乳浆大戟、千金子或南欧大戟。

进一步地，优选步骤a所述碱水解、酸中和的操作如下：取巨大戟醇提取物，加入甲醇或无水乙醇稀释，甲醇或无水乙醇的体积为巨大戟醇提取物体积的0.5～2倍，加碱水解0.5～24小时，每升混合溶液中碱的含量为5～40g，水解完毕，加酸调节pH至7得到水解液，然后将水解液浓缩得膏状物。