[发明专利]一种凝结芽孢杆菌检测引物组、试剂盒及其方法有效
| 申请号： | 201410243762.4 | 申请日： | 2014-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN104152543A | 公开（公告）日： | 2014-11-19 |
| 发明（设计）人： | 符雷;郗洪生;施腾鑫;陆亚怡 | 申请（专利权）人： | 江苏恒丰强生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 丁清鹏 |
| 地址： | 226100 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 凝结 芽孢 杆菌 检测 引物 试剂盒 及其 方法 | ||
1. 一种凝结芽孢杆菌检测的引物组，其特征在于，所述引物组以凝结芽孢杆菌CK基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，其核苷酸序列与SEQ ID NO.1-4相同。
2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述两对引物分别为：
外引物F3：TTTTGGCTCACGGAAGAG，
外引物B3：TGAACTGGCAGTCATACG，
内引物FIP：AGAACGCCTTCAAAATCGCACTT
TTAGCTTGAATTATTACGGGAC，
内引物BIP：AACTTTAATAAGGCACCGATTGT
GGTTTTATCTCGGGGATTTTGTCG。
3. 一种采用如权利要求1所述的引物组的凝结芽孢杆菌检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含：引物组、阳性对照品、LAMP反应液、Bst DNA聚合酶和显色液。
4. 根据权利要求3所述的凝结芽孢杆菌检测试剂盒，其特征在于：所述引物组，包括内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，其核苷酸序列与SEQ ID NO.1-4相同，所述外引物和内引物添加的摩尔比为 1 :4～8。
5. 根据权利要求3所述的凝结芽孢杆菌检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照品为含有凝结芽孢杆菌的基因组 DNA。
6. 根据权利要求3所述的凝结芽孢杆菌检测试剂盒，其特征在于：所述LAMP 反应液中含有 0.6～1.4mmol/L dNTP，5～10 mmol/L Mg2+，0.5～1.2mol/L Betaine，10×Thermopol Buffer。
7. 根据权利要求3所述的凝结芽孢杆菌检测试剂盒，其特征在于：所述Bst DNA聚合酶和显色液为市售，显色液为GeneFinder。
8. 一种如权利要求3所述凝结芽孢杆菌检测试剂盒的凝结芽孢杆菌检测方法，其特征在于：包括以下的步骤：
（1）提供待测样品 DNA ；
（2）在 LAMP反应体系中加入所述引物组、LAMP反应液、BstDNA聚合酶，进行恒温扩增反应后灭活；
（3）灭活后部分产物加入显色液，观察显色结果，并同时对比阳性对照品的显色结果，若显色结果一致，说明待测样品中含有凝结芽孢杆菌，若显色结果不一致，则说明待测样品中不含有凝结芽孢杆菌。
9. 根据权利要求8所述的凝结芽孢杆菌检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述恒温反应的温度范围为58℃，反应时间为80min。
10.根据权利要求8所述的凝结芽孢杆菌检测方法，其特征在于：步骤（3）中，所述灭活的温度为80℃，灭活时间为10min。
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