[发明专利]单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测单核细胞增生性李斯特菌的免疫PCR检测试剂盒。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌，是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是唯一对人致病的、典型的胞内寄生菌，可以导致严重的人畜共患传染病，如脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多等症状。1988年，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)发表“食源性李斯特菌病劝告书”，指导全世界各国如何预防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成为新的重要的食源性疾病病原菌，WHO将其与E.coli O157、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌并列为20世纪90年代四大食源性致病菌。该菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香肠、加工禽类、生肉、鱼、虾、烟熏鱼、生蔬菜。目前单核细胞增生李斯特菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。

免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以单核细胞增生李斯特菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及单核细胞增生性李斯特菌快速检测产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测单核细胞增生性李斯特菌的PCR反应管。

本发明的另一个目的是提供一种用于检测单核细胞增生性李斯特菌的免疫PCR检测试剂盒。

本发明的第一方面是提供了一种用于检测单核细胞增生性李斯特菌的PCR反应管，所述的PCR反应管包括：

免疫PCR管；和

包被于所述的免疫PCR管管体内壁的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体，所述的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6，CGMCC No.8002或1B4E7A6C9，CGMCC No.8765产生。

本发明的第二方面是提供了一种检测试剂盒，所述的试剂盒含有所述的PCR反应管。

在一优选例中，所述的试剂盒还含有容器a，所述的容器a中装有所述的PCR反应管。

在另一优选例中，所述的试剂盒还含有缓冲液、dNTP、TaqDNA聚合酶、ddH₂O、引物、阳性对照和阴性对照。

在另一优选例中，所述的引物包括正向引物和反向引物。

在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的单核细胞增生性李斯特菌菌液，所述的阴性对照为灭菌的李氏增菌肉汤。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1是本发明的试剂盒的使用流程和原理图。

图2是单核细胞增生性李斯特菌直接PCR梯度稀释检测限研究结果。

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-8号泳道对应的细菌浓度为：1,17×10⁸～1,17×10cfu/mL。

图3是单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒检测单核细胞增生性李斯特菌梯度稀释检测限研究结果。

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-8号泳道对应的细菌浓度为：1,17×10⁸～1,17×10cfu/mL。

图4是检测试剂盒特异性的结果。

其中，M：1000bp DNA ladder；N：阴性对照；1-12号泳道为：单核细胞增生性李斯特菌ATCC43251，单核细胞增生性李斯特菌ATCC82346，金黄色葡萄球菌ATCC27660，鼠氏伤寒沙门氏菌ATCC22956，肠炎沙门氏菌ATCC13076，副溶血弧菌ATCC17802，小肠结肠炎耶尔森氏菌ATCC23715，福氏志贺氏菌ATCC12022，宋内氏志贺氏菌ATCC25931，痢疾志贺氏菌ATCC51329，乙型溶血性链球菌ATCC10373，阪崎肠杆菌ATCC29004。

图5是模拟带菌牛奶样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。

A(1)模拟带菌牛奶样品直接PCR检测限研究结果；

A(2)模拟带菌牛奶样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；