[发明专利]一种利用离子交换色谱法测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学物质定量分析技术领域，涉及一种N-乙酰氨基葡萄糖的定量分析方法，具体涉及一种利用离子交换色谱法测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法。 

背景技术

N-乙酰氨基葡萄糖是几丁质和壳聚糖重要的水解产物，N-乙酰氨基葡萄糖作为治疗骨关节炎、风湿性关节炎药物已经在医药领域得到广泛应用。此外，N-乙酰氨基葡萄糖作为低热量甜味剂在食品添加剂领域也有广泛的应用。 

目前，对N-乙酰氨基葡萄糖的定量测定主要采用以下几种方法： 

（1）3,5-二硝基水杨酸（DNS法）。该法对于N-乙酰氨基葡萄糖有较好的显色效果，但此法灵敏度较低，测定范围较小，在200-1000 ug/L之间。

（2）改良的Schales法。该法对于N-乙酰氨基葡萄糖也有较好的显色效果，此法的测定范围在10-80 ug/L之间灵敏度较高，稳定性好，重复性好，但是其测定范围较窄，对实验操作要求较高，误差较大。 

（3）Elson-Morgan法。该法是测定氨基糖的特征显色法，用于测定N-乙酰氨基葡萄糖时需将N-乙酰氨基葡萄糖水解成游离的氨基葡萄糖后测定，其缺点是N-乙酰氨基葡萄糖在水解过程中存在不完全水解现象，因此该法不能用于精确测定N-乙酰氨基葡萄糖的含量。 

上述化学方法都是通过显色反应来实现样品中N-乙酰氨基葡萄糖含量的测定，显色反应受样品自身颜色的影响较大，难以精确定量，误差较大。因此研究和开发一种准确、快速的N-乙酰氨基葡萄糖的定性、定量分析方法对于该类产品的检测评价和推广应用具有重要的意义。 

发明内容

发明目的：针对现有检测技术的不足，本发明的目的是提供一种利用离子交换色谱法检测N-乙酰氨基葡萄糖的方法，该方法精密度高、重现性好、准确度高，能够实现对样品的直接检测，无需对样品进行其他前处理，大大减少分析时间、提高检测方法的准确性、方便可靠。 

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为： 

一种利用离子交换色谱法检测N-乙酰氨基葡萄糖的方法，包括以下步骤：

（1）离子交换色谱系统与色谱条件：

在美国Dionex ICS5000离子交换色谱系统上，采用Dionex AminoPac PA10（2×250mm）色谱柱带保护柱，柱温30℃，自动上样，上样量25μL；以10mmol/L氢氧化钠为流动相，流速0.25mL/min。电化学检测器检测模式为金工作电极和pH-Ag/AgCl复合型参比电极，采用积分脉冲安培检测法和色谱峰面积积分法测定N-乙酰氨基葡萄糖的含量；

（2）N-乙酰氨基葡萄糖保留时间（RT）和标准工作方程测定 

以N-乙酰氨基葡萄糖标准品配制0.5-10mg/L的标准溶液，采用步骤（1）中的色谱条件分析，得到N-乙酰氨基葡萄糖的保留时间；利用外标法绘制N-乙酰氨基葡萄糖浓度--峰面积标准曲线，得到N-乙酰氨基葡萄糖的标准工作方程；

（3）N-乙酰氨基葡萄糖的测定

将含N-乙酰氨基葡萄糖的待测样品溶解于20-30℃的蒸馏水中，定容并调节待测N-乙酰氨基葡萄糖的浓度0.5-10.0mg/L，于10000rpm条件下离心10min后以0.22μm微滤膜过滤上清液得样品液，采用步骤（1）中的色谱条件进行色谱检测，根据N-乙酰氨基葡萄糖的保留时间确定N-乙酰氨基葡萄糖峰，根据N-乙酰氨基葡萄糖的标准工作方程计算N-乙酰氨基葡萄糖的含量。

步骤（2）中，N-乙酰氨基葡萄糖保留时间为4.784min； 

步骤（2）中，N-乙酰氨基葡萄糖标准工作方程为：A = 3.3849c+1.0002。上述标准工作方程中，A表示色谱峰面积（nC·min），c表示N-乙酰氨基葡萄糖组分浓度（mg/L）。

有益效果：与现有的N-乙酰氨基葡萄糖的测定方法相比，本发明利用高效液相离子交换色谱测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法具体的优点包括：首次建立了高效液相离子交换色谱精确定量测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法，采用Dionex AminoPac PA10（2×250mm）色谱柱，通过10mmol/L氢氧化钠等度洗脱显著提高了N-乙酰氨基葡萄糖的分离度及检测效率。该方法精密度高、重现性好、准确度高、能够实现对样品的直接检测，无需对样品进行其他前处理，大大减少分析时间、提高检测方法的准确性、方便可靠，对于N-乙酰氨基葡萄糖产品的检测评价和推广应用具有重要意义。 

附图说明