[发明专利]LAMP检测玉米MIR162的引物组、试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及转基因植物品系的检测方法，具体涉及LAMP检测玉米MIR162的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

自1996年转基因作物投入商业化种植以来，经济社会效益逐步显现。根据国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA)的研究报告，2012年全球转基因作物种植面积达到1.7亿公顷，较1996年（170万公顷）增长了100倍。这些数字反映了全球转基因生物育种的发展态势。但是由于转基因技术可能产生新毒素和过敏原、导致抗性基因的基因漂移等原因，国际社会对转基因食品的安全性仍有相当大的争议。包括我国在内的世界许多国家都出台了转基因产品管理法规，要求对转基因产品进行检测、标识和管理。

转基因玉米作为目前世界上最主要的转基因作物之一，占全世界转基因作物种植面积的 30%以上，仅次于转基因大豆。自2009年以来，我国进口玉米大幅增长，2012年全年玉米进口520.74万吨，同比增长197%，主要进口来源地为美国。然而，我国许可进口的转基因玉米品系只有13个。根据我国法律法规，必须对入境玉米进行转基因检测以排除未批准玉米品系进境。

MIR162是由先正达公司开发的抗鳞翅目昆虫的转基因玉米，该品系是通过DNA重组技术，将一种来自苏云金芽孢杆菌的抗鳞翅类昆虫的特异性抗虫基因Vip3A导入玉米基因组中。目前Mir162玉米已经在美国、加拿大、阿根廷、巴西、日本和俄罗斯等国获得了种植批准，并通过了加拿大食品检疫局（CFIA）的安全性审批，但中国农业部并未批准该转基因玉米品系进口。为防止非法转基因生物及其产品在国内种植和销售，对MIR162这种未批准转基因玉米品系的检测十分重要。

转基因玉米成分的检测主要采用TaqMan实时荧光 PCR方法和普通 PCR方法。普通 PCR方法由于操作繁琐、耗时长、染料EB有较强毒性、易污染环境等缺点已逐渐被实时荧光 PCR检测方法所取代。TaqMan实时荧光 PCR灵敏度高、特异性好，但需要荧光PCR仪，设备和试剂成本昂贵，并不普遍适用于检验检疫一线的基层实验室和现场检测。  

近年来，环介导等温基因扩增技术（Loop-Mediated Isothermal Amplification，以下简称 LAMP）发展迅速。LAMP是日本荣研化学株式会社于 2000年前后开发出的基因扩增技术，具有快速简便、操作准确、容易普及、安全可靠的优点，不需要特殊的试剂和仪器设备，成本低廉，适用于检验检疫一线的基层实验室和现场检测。

国内发布的转基因玉米MIR162品系的检测标准是SN/T 1196-2012，国外发布的转基因玉米MIR162品系的检测方法标准是欧盟官方方法“Event-specific method for the quantification of maize MIR162 by real-time PCR (CRLVL08/08VR) ”，这两个标准均采用实时荧光 PCR方法。

其他研究包括：（1）邓婷婷等2012年发表了“转基因玉米MIR162品系的实时PCR及可视芯片检测方法研究”（植物检疫, 2012, 26(5), 14-18）。（2）Jae-Hwan Kim等2009年发表了利用多重PCR检测四个转基因玉米品系（3272、LY038、MIR162和MON88017）的方法（J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 2009, 52(1), 105-107）。（3）路兴波等申请了专利“用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物、探针及其应用”（CN201210053592）和“用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物及荧光标记探针及其应用”（CN201210052534）。这些研究全部采用的普通PCR方法和荧光PCR方法。

目前尚未发现将 LAMP应用于转基因玉米MIR162品系检测的方法和试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速简便、准确灵敏、容易普及、适用基层一线实验室和现场应用的转基因玉米MIR162品系检测方法。

为实现上述目的， 本发明提供一种用于检测转基因玉米MIR162品系的LAMP检测引物组。

本发明还保护一种用于检测转基因玉米品系MIR162的LAMP检测试剂盒，其特征在于：含有上述引物组。

本发明还保护一种用于检测转基因玉米品系MIR162的LAMP检测方法，其特征在于：包括使用所述引物组或者所述试剂盒的步骤。