[发明专利]一种用于纯化并固定化组氨酸标签蛋白的磁性亲和纳米颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于纯化并固定化组氨酸标签蛋白的磁性亲和纳米颗粒，其特征在于，包括：四氧化三铁纳米颗粒和包裹于所述四氧化三铁纳米颗粒外部的聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层表面螯合有镍离子。

2.根据权利要求1所述的磁性亲和纳米颗粒，其特征在于，所述磁性亲和纳米颗粒的粒径为200-300纳米。

3.一种根据权利要求1所述的磁性亲和纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提供Tris-HCl缓冲液配置多巴胺溶液，加入四氧化三铁纳米颗粒，搅拌，通过磁分离得到聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒；

2）提供镍离子溶液，将步骤1）中制备得到的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒分散在所述镍离子溶液中，搅拌，通过磁分离获得所述磁性亲和纳米颗粒。

4.一种根据权利要求1所述的磁性亲和纳米颗粒在组氨酸标签蛋白的纯化中的应用。

5.一种根据权利要求1所述的磁性亲和纳米颗粒在组氨酸标签蛋白的一步纯化固定化中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）提供根据权利要求1所述的磁性亲和纳米颗粒，加入平衡缓冲液平衡后磁分离除去上清；

2）向步骤1）中平衡后的磁性亲和纳米颗粒中加入细胞裂解上清液，振荡孵育，磁分离收集所述磁性亲和纳米颗粒，获得固定化酶；

其中，所述细胞裂解上清液含有组氨酸标签蛋白，所述组氨酸标签蛋白通过所述磁性亲和纳米颗粒得到了一步纯化固定化。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述细胞裂解上清液为重组大肠杆菌裂解上清液。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述重组大肠杆菌重组表达带有组氨酸标签的转氨酶。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述固定化酶的比活相对所述细胞裂解上清液的比活提高了两倍。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述固定化酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受度，并且具有良好的重复使用性。