[发明专利]用于检测痛风相关SNP位点的等位基因特异性引物及其应用

权利要求书

1.一种用于检测痛风相关SNP位点的等位基因特异性引物，其特征在于：包括针对SNP位点Rs1333049序列设计的引物对Fw91、Rn191，及针对SNP位点Rs6855911序列设计的引物对Fw11、Rn111；各引物具体为：

（1）针对SNP位点Rs1333049序列设计的引物对：

引物Fw91序列：TGGACACTCTAATCCCTGCTGAAAG；

引物Rn191序列：CAGGCGGATGCTCCTCTGCAAGT；

（2）针对SNP位点Rs6855911序列设计的引物对：

引物Fw11序列：GGCAGTGGACATCTTTCAGGGTG;

引物Rn111序列：GTCTTCATCTACTTGGCATCATCTC。

2.一种用于检测痛风相关SNP位点的等位基因特异性引物，其特征在于：包括针对SNP位点Rs1333049序列设计的引物对Fw91、Rn291，及针对SNP位点Rs6855911序列设计的引物对Fw11、Rn211；各引物具体为：

（1）针对SNP位点Rs1333049序列设计的引物对：

引物Fw91序列：TGGACACTCTAATCCCTGCTGAAAG；

引物Rn291序列：CAGGCGGATGCTCCTCTGCAAGC；

（2）针对SNP位点Rs6855911序列设计的引物对：

引物Fw11序列：GGCAGTGGACATCTTTCAGGGTG;

引物Rn211序列：GTCTTCATCTACTTGGCATCATCTT。

3.一种利用权利要求1或2所述的引物对外周血样品进行SNP分型检测的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：采用EDTA抗凝剂处理外周血，将外周血直接采集在EDTA抗凝管中，上下颠倒混匀，从血液样品中部吸取0.8μL作为模板；

步骤二：采用real-time PCR反应仪器进行real-time PCR扩增，其中反应体系和反应程序具体如下：

反应体系：反应体系的总体积为30μL，含有模板0.8μL、引物对中的两引物各0.4μmol/L、缓冲液3μL、MgCl₂3.5mmol/L、海藻糖2.5mmol/L、硫 酸铵10 mmol/L、甘油10%（w/v）、TW-20 0.1%（W/V）、dNTP 0.25 mmol/L、0.5x SYBR Green I染料和Taq DNA聚合酶1.8 U，其余成分为无菌水；其中，各组分的浓度均是以反应体系的总体积30μL为基准；

所述缓冲液为PCR buffer经NaOH调节pH值至9.3后的溶液；

所述引物对为下述引物对中的任一对：引物对Fw91、Rn191；引物对Fw91、Rn291；引物对Fw11、Rn111；引物对Fw11、Rn211；

反应程序为：

。

4.如权利要求3所述的利用引物对对外周血样品进行SNP分型检测的方法，其特征在于：所述步骤一中的模板也可采用滤纸干血样品，其制备方法如下：采集外周血时直接将0.8μL外周血滴在面积为0.5cm²的滤纸上，将带有血液样品的滤纸直接加入所述反应体系中。