[发明专利]一种哺乳动物血液基因组DNA提取试剂盒及提取哺乳动物血液基因组DNA的方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种哺乳动物血液基因组DNA提取试剂盒及提取哺乳动物血液基因组DNA的方法，属于生物技术领域。

背景技术

    DNA提取是分子生物学研究的基础技术，目前已经发展了多种从血样中提取DNA的方法。在血液中含有大量的蛋白质及盐类，其性质与核酸的物理性质非常相似。在血样DNA提取过程中处理不当极易与DNA共同沉淀下来，并且难以分离，这将大大影响血样DNA的提取质量。

为降低或清除蛋白质及盐类对血样DNA提取的影响，现有的血样提取DNA过程中常常采用有机试剂，并需要多步操作，以尽可能地去除蛋白质及盐类。

普遍采用的方法为：

1）采用酚、氯仿抽提法来去除蛋白质和盐，通过多次抽提来提高提取的DNA样品的质量。苯酚、氯仿提取DNA是利用苯酚作为蛋白质的变性剂，反复抽提去除蛋白质。此方法可有效分离DNA和蛋白质，但使用的有机试剂挥发性大，对人体有较大的毒害性，且耗时长、导致DNA降解的可能性也相应增加。步骤也相对繁杂，所需要的操作技能较高。

2）使用SDS并配合使用纯化柱的方法进行血液DNA的提取。此方法提取时间短，但因采用纯化柱吸附，得到的DNA量较少。

在此方面，目前已公开报道的提取血液 DNA 的方法，主要步骤为在血样中加入细胞洗涤液，离心分离后得到残留细胞团，加入 SDS、醋酸铵、盐酸胍、蛋白酶 K 置于 60℃水浴15 ～ 30 分钟，然后经纯化柱充分结合 DNA，离心取沉淀物加入硅胶膜洗涤液洗涤两次，离心后加入TE 缓冲液，最后得到含 DNA 的保存液。实验采用了纯化柱吸附的方法，能有效地增加提取的DNA浓度，保障最大程度地回收样品中的DNA。但此方法并不能保证DNA的纯度，可能会对后期的PCR等实验造成不可预估的影响。

3）利用 SDS、蛋白质和 K 离子形成蛋白质的沉淀，并进行去除，从而得到DNA样品。这种方法主要用于提取质粒，即所称的碱裂法。但该方法得出的DNA纯度也较低。

4）通过磁珠吸附DNA后，在磁场的作用下，DNA-磁珠复合体吸附至管底或管壁，除去上清液，再对DNA- 磁珠复合体进行洗脱，来获得纯化的DNA溶液。

在此方面，目前已公开报道的磁珠法提取DNA的方法：主要通过菌体重悬、裂解、中和、磁珠结合、洗涤、洗脱几个步骤获得DNA。这种方法简单有效地提取出了DNA。但在实际操作中操作时，需要多次的重悬，因此操作步骤较多、时间也较长。

5）通过将核酸吸附于玻璃粒子或二氧化硅粒子从而达到分离和纯化 DNA 的目的。

在此方面，目前已公开报道的基于二氧化硅磁性微粒的超低量DNA提取的方法。利用表面具有小尺寸的纳米级突起的二氧化硅磁性复合微粒，高效实现超低量DNA的提取。然而，采用此纯化方法同样需要多次重悬操作，以致时间较长。

同时，已公开专利中涉及的其它一些DNA提取方法，其得率、质量均不理想。为此，本发明公开了一种哺乳动物血液基因组DNA提取试剂盒及提取哺乳动物血液基因组DNA的方法。

 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种哺乳动物血液基因组DNA提取试剂盒及提取哺乳动物血液基因组DNA的方法。

    本发明的哺乳动物血液基因组DNA提取试剂盒，由以下成分组成：红细胞裂解液、白细胞裂解液、蛋白沉淀液和DNA沉淀液，

其中，所述的红细胞裂解液的组成成分及各成分终浓度如下：Tris 10mM-150mM，NH₄Cl 100mM-300mM，EDTA二钠盐（分子式为：C₁₀H₁₄N₂Na₂O₈·2H₂O）5mM-100mM；pH为7.6-8.0；

所述的白细胞裂解液的组成成分及各成分终浓度如下：Tris 10mM-150mM，EDTA 二钠盐（分子式为：C₁₀H₁₄N₂Na₂O₈·2H₂O）5mM-100mM，0.1%-2%（w/v）的SDS，蛋白酶K （0.5-4）g/L，PH为7.6-8.0；

所述的蛋白沉淀液为NaCl、CaCl₂、NH₄Cl 和MgCl₂中的一种或几种，终浓度浓度为5-6M；