[发明专利]一种哺乳动物血液基因组DNA提取试剂盒及提取哺乳动物血液基因组DNA的方法

权利要求书

1.一种哺乳动物血液基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，由以下成分组成：红细胞裂解液、白细胞裂解液、蛋白沉淀液和DNA沉淀液，

其中，

所述的红细胞裂解液的组成成分及各成分终浓度如下：Tris 10mM-150mM，NH₄Cl 100mM-300mM，EDTA二钠盐（分子式为：C₁₀H₁₄N₂Na₂O₈·2H₂O）5mM-100mM；pH为7.6-8.0；

所述的白细胞裂解液的组成成分及各成分终浓度如下：Tris 10mM-150mM，EDTA 二钠盐（分子式为：C₁₀H₁₄N₂Na₂O₈·2H₂O）5mM-100mM，0.1%-2%（w/v）的SDS，蛋白酶K （0.5-4）g/L，PH为7.6-8.0；

所述的蛋白沉淀液为NaCl、CaCl₂、NH₄Cl 和MgCl₂中的一种或几种，终浓度浓度为5-6M；

所述的DNA沉淀液的组成成分及各成分终浓度如下：NaAC 1-3M，异丙醇 50%-70%（v/v）。

2.使用如权利要求1所述的哺乳动物血液基因组DNA提取试剂盒提取哺乳动物血液基因组DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

    1）裂解红细胞：在血样中加入红细胞裂解液，混合均匀至溶液清亮，离心，去除上部液体后得到沉淀；

    2）裂解白细胞并去除RNA：加入白细胞裂解液，充分反应后，加入RNA酶；

3）沉淀蛋白质：加入蛋白沉淀液，离心后，取上清液；

4）沉淀DNA：加入DNA沉淀液，离心后，尽去上清液；

5）将DNA沉淀加入70%乙醇洗涤，洗涤干净后，离心得DNA样品。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤（1）中血样与红细胞裂解液（RLB）的体积比为1:（3~8）。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤（1）、（3）、（4）、（5）中离心时的离心速为8000~14000rpm。

5.  根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤（2）中白细胞裂解液（TB）的量为400~700μl。

6.   根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤（3）中白细胞裂解液与蛋白沉淀液的体积比为（1-2）:（1-3）。

7.   根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤（3）中上清液与DNA沉淀液的体积比为3:（4~6）。

8.根据权利要求2所述的提取哺乳动物血液基因组DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）红细胞裂解：

取200μl血样、1200μl 红细胞裂解液加入到微量离心管中，颠倒混匀5min；于12000rpm离心3min，去尽上部红色液体；

2）裂解白细胞并去除RNA：

加入550μl白细胞裂解液，于56℃恒温水浴20min；加入25μlRNA酶，室温放置2min；

3）沉淀蛋白质

加入180μl蛋白沉淀液，静置5min；于12000rpm离心5min，取上清液至新的EP管中；

4）沉淀DNA

加入DNA沉淀液1200μl，加异丙醇至终浓度50%-70%（v/v），室温沉淀20min；于12000rpm离心5min，去除上清液；

5）洗涤DNA

加入200μl 70%乙醇溶液，轻轻摇晃两下，室温沉淀20min；于12000rpm离心5min，去除上清液；室温倒置干燥5min，加50μl双蒸水溶解。