[发明专利]用于测定蓝细菌毒素的存在或不存在的方法和试剂盒

说明书

与相关申请的交叉参考

本申请是国际申请日为2009年10月28日的国际申请PCT/US2009/062299进入中国、申请号为200980152962.6的题为“用于测定蓝细菌毒素的存在或不存在的方法和试剂盒”的发明专利申请的分案申请。本申请要求于2008年10月31日提交的美国临时申请号61/110,021的利益且是其的继续申请。该申请的内容特别地整体引入本文作为参考。

关于联邦赞助的研究或开发的声明

本申请的发明不由联邦或州基金或拨款进行。

联合研究协议的参与者名称

本申请的发明不在联合研究协议下进行。

序列表的提及

本申请不具有任何核酸、肽或蛋白质序列。

技术领域和背景技术

本发明的实施方案涉及用于检测由蓝细菌产生的毒素的试剂盒和方法。蓝细菌通常在地面淡水中发现。毒性蓝细菌水华是难对付的，在那方面此种水华可能引起毒素在供水中释放。主要蓝细菌毒素包括环肽、生物碱和脂多糖。

例如但并非限制，构成蓝细菌毒素的主要环肽是结瘤蛋白、微囊藻素-LR、微囊藻素RR和微囊藻素YR。关于结瘤蛋白的式在下文阐述：

式1

关于微囊藻素LR的式在下文阐述：

式2

关于微囊藻素RR的式在下文阐述：

式3

关于微囊藻素YR的式在下文阐述：

式4

关于微囊藻素LA的式在下文阐述：

式5

关于微囊藻素LY的式在下文阐述：

式6

关于微囊藻素LW的式在下文阐述：

式7

关于微囊藻素LF的式在下文阐述：

式8

生物碱蓝细菌毒素包括例如但不限于anaroxins和蛤蚌毒素。Anaroxins包括例如但不限于变性毒素a、变性毒素a（S）、高变性毒素（homoanatoxin）-a、柱孢藻毒素（cylindrospermopsin）。

关于变性毒素a的式在下文阐述：

图. 变性毒素的化学结构。变性毒素-a、高变性毒素-a和变性毒素-a（s）。

式9、10、11

关于柱孢藻毒素的式在下文阐述：

式12

蓝细菌脂多糖毒素并非得到如此充分表征，并且看起来比环肽、生物碱的毒性更低。

本文将使用术语“分析物”以指示人们希望测定其存在或不存在的化合物。

本文将使用术语“样品”以意指人们希望测试麦角类生物碱存在或不存在的材料。样品可以作为来自动物或植物的组织或流体获得。例如但并非限制，样品可以包括叶、种子或其他植物组织或得自动物来源的血液、尿、唾液或组织。

“提取物”是通过使样品经历溶剂的处理，从而使得样品中保留的一种或多种化合物溶解于溶液中而获得的溶液。

“等分试样”用于指示样品的子部分或级分。

层析是使溶液中的化合物分离的方法。层析可以在不同设备中执行。本文将使用术语“药液筒”以指包括其中放置固相的柱和/或漏斗的低压设备。将样品应用于固相且在低压或重力下经过。这些设备一般通过去除颗粒且使所需化合物浓缩用于制备样品。

为了本文的目的，术语“柱”将在其中溶液在压力下被迫通过固相基质的高压设备的意义上使用。固相可以是颗粒或多孔单块。

质谱分析法用于测定由化合物形成的离子的质荷比。质谱仪用于形成较大分子的片段，并且此种片段和完整离子用于鉴定此种化合物。

标准是具有已知化合物量的溶液，所述溶液用于比较数据和衍生自非标准样品的数据。标准可以使用具有包括重同位素的标记的化合物，所述重同位素允许质谱仪的操作者区分标准和分析物。

需要注意蓝细菌毒素的可靠和快速分析以监控供水，保护公共卫生和水产业。在本发明前，用于检测蓝细菌毒素的方法对于分析环境中的这些化合物不是特异或灵敏的。在本发明前，方法是耗时且劳动密集型的。

发明内容

本发明的实施方案涉及蓝细菌毒素的可靠和快速分析。本发明的实施方案具有用于监控供水、保护公共卫生和水产业的效用。本发明的实施方案涉及用于检测蓝细菌毒素的方法和试剂盒。