[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌HN-11及其菌剂

权利要求书

1.一种拮抗菌，其特征在于：该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HN-11，已于2013年10月31日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC NO：8421，其16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，主要生物学特性为革兰氏染色阳性G+，细胞为杆状，产芽孢，厌氧条件不能生长，接触酶阳性、氧化酶阳性、VP反应阳性，VP<pH6、VP>pH7均呈阴性，甲基红试验阴性，氧化葡糖糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、乳糖、甘露醇产酸，可利用柠檬酸盐，硝酸还原酶阳性，淀粉水解阳性，精氨酸双水解阴性，分解酪蛋白阳性，在50℃、pH5.7、7％NaCl条件下生长。

2.根据权利要求1所述的拮抗菌在植物病害防治中的应用，其特征在于：所述植物病害为香蕉枯萎病、番茄枯萎病、水稻纹枯病、稻瘟病、苜蓿黄萎病、十字花科蔬菜黑斑病。

3.一种微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将权利要求1所述的拮抗菌接种到营养肉汤液体培养基，以180～300rpm转速度28～35℃摇瓶培养24h，得种子液；

(2)将步骤(1)获得的种子液按5～15％体积比接入YPD或Landy液体培养基，进行液体发酵生产，其发酵生产条件为：pH6.0～7.5，发酵温度范围为28～35℃，搅拌速度为180～300转/分钟，通气量1∶1，发酵时间为48～72小时，发酵液的芽孢数≥1×10¹⁰个/ml，所述YPD培养基含有：葡萄糖 12.5g、蛋白胨20g、酵母粉5g、牛肉膏3g，蒸馏水1L，pH自然；Landy培养基含有：葡萄糖20g、L-谷氨酸5g、KH₂PO₄ 1g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、KCl 0.5g、酵母粉1g、L-苯丙氨酸2mg、MnSO₄ 5mg、CuSO₄·5H₂O 0.16mg、FeSO₄·7H₂O 0.15mg，蒸馏水1L，pH7.2；

(3)将步骤(2)所得发酵液添加8％NaCl、0.5％海藻酸钠和1％乙酸钠，混合均匀，即得HN-11菌株的水剂；或将步骤(2)所得发酵液按50～150ml/Kg的量接种到印楝渣固体培养基中，进行二次固体发酵腐熟，发酵过程中每天翻堆1次，发酵温度为25～45℃，发酵3～7天，发酵结束后添加重量1％保护剂和5％表面活性剂，在温度不高于60℃下通风干燥，使含水量控制在25％以下，包装封袋，即得固体菌剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：将步骤(2)所得发酵液浓缩至原来体积30～60％，然后添加8％NaCl、0.5％海藻酸钠和1％乙酸钠，混合均匀，即得HN-11菌株的水剂。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述印楝渣固体培养基以质量比计含有：印楝渣0～30％、大豆粉4～12％、麦麸5～25％、泥炭土30～50％、KCl 1～5％，pH6～7.5，其中印楝渣的含量不为0。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：固体菌剂中解淀粉芽孢杆菌HN-11含量达到10亿个/克以上、以质量比计含有：印楝渣12％、大豆粉8％、麦麸22％、泥炭土47％、KCl 5％、尿素1％、农乳100号5％；水剂中解淀粉芽孢杆菌HN-11含量达到3亿个/克以上、以质量比计含有：NaCl 8％、海藻酸钠0.5％、乙酸钠1％、其余为菌株HN-11发酵液，HN-11原发酵液中含有葡萄糖12.5g、蛋白胨20g、酵母粉5g、牛肉膏3g，蒸馏水1L，pH自然。

7.权利要求3~6任一项所述的制备方法制得的微生物菌剂在植物病害防治中的应用，其特征在于：所述植物病害为香蕉枯萎病、番茄枯萎病、水稻纹枯病、稻瘟病、苜蓿黄萎病、十字花科蔬菜黑斑病。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：固体菌剂还可用于防治香蕉穿孔线虫。