[发明专利]用于活的减毒病毒的方法和组合物

说明书

本申请是申请日为2008年4月4日、申请号为200880018784.3、题为“用于活的减毒病毒的方法和组合物”的专利申请的分案申请。

优先权

本申请要求2007年4月6日提交的美国临时专利申请号60/910,579的优先权权益，其全文通过引用并入本文。

技术领域

本文实施方式涉及用于稳定活的减毒病毒的组合物和方法。其他实施方式涉及用于减少活的减毒病毒降解的组合物和方法。其他实施方式还涉及这些组合物在便携式应用和方法的试剂盒中的应用。

背景技术

防止病毒感染的疫苗已经被有效地用于减少人类疾病的发病率。用于病毒疫苗的最成功的技术之一是用减弱的或者减毒的病毒(“活的减毒病毒”)株免疫动物或者人类。由于免疫之后有限的复制，减毒株不会引起疾病。然而，该有限的病毒复制足以表达病毒抗原全部的所有组成成分并且对该病毒产生有效和持久的免疫反应。因此，当后来暴露于致病的病毒株时，该免疫个体被保护免于疾病。这些活的减毒病毒疫苗是用于公众健康的最成功的疫苗之一。

在美国批准销售的病毒疫苗的十六分之十是活的减毒病毒。高度成功的活的病毒疫苗包括黄热病17D病毒，1、2和3型萨宾脊髓灰质炎病毒（Sabin poliovirus）、麻疹病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、水痘病毒以及痘苗病毒。使用痘苗病毒疫苗控制天花爆发导致第一次和仅有的人类疾病的根除。萨宾脊髓灰质炎病毒疫苗已经帮助在全世界预防顽症并且在致力根除脊髓灰质炎中被使用。幼儿接种麻疹、流行性腮腺炎、风疹以及水痘疫苗在国际范围内防止成千上万的死亡和疾病。

最近的技术进展例如重配、反求遗传学以及冷适应，已经导致用于流感和轮状病毒的活的减毒病毒的许可证的颁发。用重组DNA技术开发的许多活的病毒疫苗处于人类临床试验中，其包括用于西尼罗河疾病、登革热、疟疾、肺结核以及HIV的疫苗。这些重组病毒疫苗依赖于很好表征的减毒病毒疫苗的操作，例如腺病毒、痘苗病毒、黄热病17D或者登革热病毒、DEN-2PDK-53。安全的减毒病毒被基因工程化以表达其他病毒或者细菌性病原体的保护性抗原。几种重组病毒疫苗已经被批准用于动物用途，其包括金丝雀/猫科动物白血病重组病毒、金丝雀/犬瘟重组病毒、金丝雀/西尼罗河重组病毒以及黄热病/西尼罗河重组病毒。作为类群，活的减毒病毒疫苗是人类历史上是最成功的医学干涉之一，仅仅次于抗生素的出现并且有在全世界范围内改善公共健康的希望。

为了使活的减毒病毒疫苗是有效的，它们必须在免疫之后能够复制。因此，任何使病毒失活的因素可以削弱疫苗。例如，第二次世界大战之前天花疫苗的广泛分发和应用被限制，因为该病毒在环境温度下仅仅几天后就失活。在20世纪20年代，法国科学家证明冷冻干燥的疫苗提供长期稳定性，并且在20世纪40年代发展了用于大规模生产冷冻干燥疫苗的技术(参见，例如Collier1955)。除了冷冻干燥外，各种能够帮助稳定活的减毒病毒疫苗中的病毒的添加剂也已经被确定(参见例如Burke,Hsu等1999)。这些稳定剂典型地包括一种或者多种以下的成分：二价阳离子、缓冲盐溶液、螯合剂、尿素、糖(例如，蔗糖、乳糖、海藻糖)、多元醇(例如，甘油、甘露醇、山梨糖醇、聚乙二醇)、氨基酸、蛋白水解物(例如，酪蛋白水解物、乳清蛋白水解物、蛋白胨)、蛋白质(例如，明胶、人血清白蛋白)或者聚合物(例如，葡聚糖)。

然而，即使使用这些稳定剂，许多常用的疫苗为了稳定仍然需要冷藏。其他常用的疫苗对温度极限敏感；过分的热或者意外的冷冻可以使疫苗失活。在整个分送期间维持这种“冷链(低温运输系统，cold chain)”在发展中国家特别困难。因此，仍然存在对于改进现有和新开发的活的减毒病毒疫苗的稳定性的需求。

黄病毒是最不稳定的病毒之一。它们是具有大约11,000个碱基的RNA基因组的有包膜病毒。大多数黄病毒通过节肢动物媒介——通常为蚊子——传播。有超过70种不同的黄病毒，其基于血清学分组为三种主要类别：登革热组、日本脑炎组以及黄热病组。在已知的黄病毒中，40种通过蚊子传播，16种通过虱类传播以及18种病毒没有确定的昆虫媒介。因此，大多数黄病毒已经进化到既在它们的节肢动物媒介中又在它们的脊椎动物宿主种类(通常是鸟类或者哺乳动物)中复制。扩张的都市化、世界范围的旅行以及环境变化(例如采伐森林或者雨水类型)已经导致威胁人类公共健康的数种黄病毒的出现。这种病毒包括但不限于黄热病病毒、登革热病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒和蜱传脑炎病毒。