[发明专利]制备富含虾青素奇数脂肪酸一酯的虾青素一酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备富含虾青素奇数脂肪酸一酯（虾青素十三烯酸一酯和虾青素十五酸一酯）的虾青素一酯的方法。

背景技术

南极磷虾是南大洋生物链的关键物种，是世界上生物质能最大的、进化最成功的单种生物资源，约6～50亿吨（因估计方法不同有较大差异，最低保守估计也有6～10亿吨），年可捕获量达1～1.5亿吨，多于全世界年渔业捕获总量（0.99亿吨），我国有18亿亩耕地，粮食年产量近6亿吨，南极磷虾的年可捕获量相当于3～4.5亿亩耕地，是庞大的境外资源。

南极磷虾含丰富的油脂成分，尤其含丰富的虾青素、虾青素一酯和虾青素二酯。虾青素一酯是虾青素的一端连接一个脂肪酸分子。该脂肪酸分子可能是奇数的也可能是偶数的，因此虾青素一酯是一个分子群，其中的每个分子在南极磷虾的生长发育中均起着重要的作用。将富含虾青素十三烯酸一酯和虾青素十五酸一酯分离出来，有利于推进对虾青素奇数脂肪酸一酯的再分离、进一步纯化和生理活性差异的研究，也有益于未来生产制备的不同奇数的虾青素脂肪酸一酯的有效利用。目前尚无一种有效的从虾青素一酯中分离出奇数脂肪酸一酯（虾青素十三烯酸一酯和虾青素十五酸一酯）的方法。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种从虾青素一酯中分离制备富含虾青素奇数脂肪酸一酯（虾青素十三烯酸一酯和虾青素十五酸一酯）的虾青素一酯的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种制备富含虾青素奇数脂肪酸一酯（虾青素十三烯酸一酯和虾青素十五酸一酯）的虾青素一酯的方法，步骤为：

（1）制备南极磷虾虾油：取南极磷虾，在35℃～65℃下通风干燥至恒重，粉碎至20目，用六号汽油在30℃下提取3次，每次1h，油料液比为1：6（质量比）,得粗提取油，再用丙酮在30℃下提取粗提取油3次，每次0.5h，料液比为1：5（质量比）,以除去不溶的残渣，得南极磷虾虾油；

（2）虾青素一酯的提取：将68g200～300目的GF₂₅₄硅胶置于干燥箱中120℃活化12h，然后用石油醚溶解装柱，备用；按体积比依次为石油醚：乙酸乙酯=10：1，9：1，8：1，7：1，6：1，5：1，4：1，3：1,2：1,1：1的比例配制洗脱液各500mL，备用；

取2ml上述制备的南极磷虾虾油进样，先用100ml石油醚进行淋洗，再用体积比依次为石油醚：乙酸乙酯=10：1，9：1，8：1，7：1，6：1，5：1，4：1，3：1,2：1,1：1的洗脱液进行淋洗，收集体积比为石油醚：乙酸乙酯=3：1,2：1,1：1的洗脱液，合并，旋转蒸发除去石油醚和乙酸乙酯，所得产品即为虾青素一酯；

（前两步制备虾青素一酯，还可以按照公开号为CN102746205A的专利申请中的方法制备得到）

（3）奇数脂肪酸一酯的分离：取上述制备的虾青素一酯20mg，溶解在1.5ml二氯甲烷中，得虾青素一酯溶液，取0.5ml，用毛细点样管在AgNO₃高效薄层板上将其点成线（距板下沿1.5cm处），然后放在加有24ml展开剂的玻璃层析缸[200mm×200mm（L×H）]内展开；展开后取出晾干，可见虾青素一酯被展开呈2条带，从上（指溶剂前沿）至下依次为：①第一条红色带Rf为0.41；②第二条黄色带Rf为0.36；将2条带刮下，放入盛有二氯甲烷的试管中，将试管放在40KHz、200～500W功率下超声3～10分钟，然后在4000～6000r/min下离心，取上清液，重复以上提取过程3～5次至刮下的条带无色，分别得到2条带各自对应的提取液，旋转蒸发除去二氯甲烷，得到2种样品，经检测分析，，这2种样品依次为（各百分数按质量百分比计）：第一条红色带为含7～9％虾青素十三烯酸一酯和48～51％虾青素十五酸一酯的虾青素一酯；第二条黄色带为含100％偶数虾青素脂肪酸一酯的虾青素一酯。

所述AgNO₃高效薄层板是通过以下方法制备得到的：将薄层层析硅胶板H（10cm×20cm）在质量浓度为1～2.5％的AgNO₃甲醇溶液中浸泡4～16分钟，取出，晾干0.5～2.5小时，再放入干燥箱中45～85℃烘0.5～1.5小时，即得。

所述展开剂是由体积比为9.5ml:3ml：10μl的石油醚、丙酮和三乙胺混合而成。