[发明专利]快速鉴别寄生于马属动物的裸头绦虫的专用引物及其鉴别方法

权利要求书

1.快速鉴别寄生于马属动物的裸头绦虫的专用引物，其特征在于：所述引物为：上游引物为5’-GCAGAGTTTTGCTGATTTTATGAAG-3’，下游引物为5’-CCACTATACTCAGTATTAAATCCACTAACAAG -3’。

2.快速鉴别诊断马属动物裸头绦虫病的专用引物，其特征在于：所述引物为：上游引物为5’-GCAGAGTTTTGCTGATTTTATGAAG-3’，下游引物为5’-CCACTATACTCAGTATTAAATCCACTAACAAG -3’。

3.寄生于马属动物的裸头绦虫的NAD1核苷酸序列，所述裸头绦虫为叶状裸头绦虫和大裸头绦虫，其特征在于：所述叶状裸头绦虫的NAD1核苷酸序列参见SEQ ID No.1，所述大裸头绦虫的NAD1核苷酸序列参见SEQ ID No.2。

4.快速鉴别寄生于马属动物的裸头绦虫的方法，其特征在于：应用权利要求2中所述引物对裸头绦虫的NAD1进行PCR扩增，测序，测序结果与SEQ ID No.1和SEQ ID No.2中的序列比对，若待测样品的核苷酸测序结果与叶状裸头绦虫核苷酸序列相似性高，则为叶状裸头绦虫；若核苷酸测序结果与大裸头绦虫核苷酸序列相似性高，则为大裸头绦虫。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增的条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环；最后一个循环结束后，72℃延伸10min。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述裸头绦虫的NAD1从孕节或虫卵中提取。

7.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述从虫卵中提取裸头绦虫的NAD1的方法是先用沉淀法收集再用漂浮法收集。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤如下：

（1）应用权利要求2中所述引物对裸头绦虫的NAD1进行PCR扩增，获得PCR产物；

（2）经琼脂糖凝胶电泳，回收PCR目的产物，将PCR目的产物与T-easy载体在16℃连接过夜，转染JM109感受态细胞；

（3）挑选单菌落培养，PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序，测序结果与两种绦虫各自特有的核苷酸序列进行比对，若待测样品的核苷酸测序结果与叶状裸头绦虫核苷酸序列相似性高，则为叶状裸头绦虫；若核苷酸测序结果与大裸头绦虫核苷酸序列相似性高，则为大裸头绦虫。