[发明专利]一种以流感病毒为载体的HCV嵌合疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种以流感病毒为载体的HCV嵌合疫苗及其制备方法。

背景技术

丙肝是危害人类健康和生命安全的致命杀手，在发展中国家防控形势尤为严峻，而丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是引起慢性肝病的主要病原体，以血液、性生活黏膜为主要感染传播途径。据国家权威机构报告，全世界约有1.7-2.0亿人为HCV感染者，我国HCV感染者率约在4000万以上。HCV感染后，约50%-85%转为慢性肝病，其中20%-30%发展为肝硬化，部分转为肝细胞肝癌（HCC）。目前，聚乙二醇、干扰素-a和利巴韦林联合应用是丙型肝炎治疗的标准方案，其有效率仅为50%，且副作用大，费用昂贵，停药后有很高的复发率，由此许多丙肝患者失去治疗机会，已成为全球性的、严峻的公共卫生问题。

目前，疫苗接种是预防和控制传染病的最有效措施。

在过去数十年中，重组乙肝疫苗的广泛应用大大降低了乙肝感染率和发病率，为人类健康作出了巨大贡献。然而，对于丙型肝炎而言，至今还没有被批准使用的疫苗，但对于疫苗的研究一直是国际社会关注的热点。当前，HCV疫苗的研究主要集中在合成多肽疫苗、重组多表位疫苗、核酸疫苗、病毒载体疫苗等，已有几个试验疫苗正在临床前或进入临床研究阶段。从已有研究结果显示，至今没有突破性进展，仍停滞不前，有诸多关键技术瓶颈问题亟待解决。从研究看，由于HCV的基因组变异率高，交叉免疫保护抗原差，尚缺乏有效的敏感细胞和动物感染模型，对其细胞免疫和体液免疫应答在HCV感染恢复中的作用仍不十分清楚，使以诱导保护性抗体产生为目的的预防性疫苗和/或治疗性疫苗的研究步履艰难。此外，已有研究的HCV疫苗免疫后诱发机体产生免疫效果差、免疫保护不全面、且注射不能产生有效的黏膜免疫和细胞免疫效果，给丙肝疫苗的研究提出了挑战。因此，发展安全、有效的丙肝疫苗已成为当今生命科学亟待解决的重大科学问题。

HCV的基因组结构类似黄病毒属和瘟病毒属，1991年国际病毒命名委员会将其归为黄病毒科(flaviciridae)丙型肝炎病毒属(hepacivirus)。HCV基因组为单股正链RNA病毒，基因组全长9.6kb，其5’端有一个319－341nt结构较为保守的非编码区（Non-coding region，5’-NCR），后面为一个连续的开放阅读框架（open reading frame，ORF），可编码一个多聚蛋白前体，此多聚蛋白前体由宿主和病毒的信号肽酶剪接成3个结构蛋白（Core、E1、E2）和7个非结构蛋白（P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B）。HCV C蛋白由191个氨基酸残基组成，是HCV基因组中较为保守的结构区域。5’-NCR区最为保守，而3’-NCR对于HCV RNA的正常复制是不可缺少的。由于HCV病原体复杂的感染致病特点，给HCV的免疫防控带来了难题。

HCV基因序列的高度变异性，丙肝疫苗的研制面临很多挑战：①HCV RNA和病毒蛋白变异性很大，至少存在6种基因型及大约70种基因亚型，中国主要流行亚型是1b，2a，也有其他亚型感染报道；②HCV准种的存在也是产生宿主免疫逃逸及容易导致慢性感染的机制之一，严重影响了HCV疫苗发展及HCV预防和治疗的成功率；③HCV在体外不能大量有效繁殖和缺乏感染的细胞、动物敏感模型，而黑猩猩是HCV感染的唯一动物实验模型，但黑猩猩受到保护而难以普遍使用；④HCV致病的免疫学机制尚未完全澄清，且性生活黏膜途径感染对注射疫苗免疫不能产生交叉免疫保护，这些都严重限制了HCV疫苗研发的进程。