[发明专利]一种检测柑桔黄脉病毒的引物对及检测方法无效
| 申请号： | 201410025175.8 | 申请日： | 2014-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN103757135A | 公开（公告）日： | 2014-04-30 |
| 发明（设计）人： | 陈洪明;李中安;王雪峰;周彦;唐科志;周常勇 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院柑桔研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所 31219 | 代理人： | 余明伟 |
| 地址： | 400712 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 柑桔 病毒 引物 方法 | ||
1.一种用于柑桔黄脉病毒检测的引物对，其特征在于，所述引物对的序列为：
上游引物：5’-TACCGCAGCTATCCATTTCC-3’
下游引物：5’-GCAGAAATCCCGAACCACTA-3’。
2.一种用于柑桔黄脉病毒检测的试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1所述的引物对。
3.一种快速检测柑桔黄脉病毒的RT-PCR的检测方法，其特征在于包括如下步骤：提取柑桔样品总核酸，设计特异性引物，对待测样品进行RT-PCR扩增，最后电泳鉴定：
所述RT-PCR扩增所需试剂如下：
RNAiso Plus1ml，氯仿200μL，异丙醇，75%乙醇，DEPC水，
2×Buffer液5μL，MgSO40.3μL，RT/Taq酶0.2μL，正反引物各0.2μL，灭菌去离子水2.1μL；
RT-PCR扩增条件为：程序为42℃，30min；94℃，2min;94℃，30S，55℃，30S，72℃，40S，40个循环；72℃，5min。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述提取样品总核酸，样品主要取春、秋梢嫩叶叶脉及附近组织。
5.根据权利要求3或4所述的检测方法，其特征在于：所述柑桔黄脉病毒的引物对如权利要求1所述。
6.根据权利要求3或4所述的检测方法，其特征在于：电泳得到的特异性片段大小为612bp。
7.权利要求1所述的引物对在柑桔黄脉病毒检测中的用途。
8.权利要求2所得试剂盒在柑桔黄脉病毒检测中的用途。
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