[发明专利]一种用于甲状腺乳头状癌早期诊断的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学范畴，特别涉及一种用于甲状腺乳头状癌早期诊断的试剂盒。 

背景技术

目前，人类甲状腺癌是较常见的内分泌恶性肿瘤之一，近年来发病率逐年升高。平均发病年龄为50岁，以女性居多，其中甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）的发病率最高，约占所有发病类型的80%。对甲状腺癌的诊断目前主要依靠甲状腺超声以及穿刺活检病理，虽然穿刺活检病理诊断甲状腺癌已经广泛应用于临床，但仍存在30%可疑或不确定是否为甲状腺癌的诊断结果，并且穿刺是一项有创检查，给患者带来较大痛苦。甲状腺癌一般以手术治疗，早期发现进行治疗的患者五年生存率能达95%，晚期发现的患者五年生存率降至59%，因此为提高甲状腺癌诊断的准确性和早期诊断率，有必要寻找一种创伤性小，灵敏度和特异度均较高的新的诊断方法。 

基因组以及高通量基因芯片技术的应用使人们能够更快速全面地了解肿瘤发生发展过程中基因水平的变化。表达谱芯片技术最先应用于疾病的鉴别诊断，其广泛应用乳腺癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、结肠癌、肺癌、卵巢癌以及恶性黑色素瘤等的癌组织中差异基因表达研究，提供了大量的有意义的肿瘤分子标志物。而利用非侵入性检测手段发现肿瘤新的分子标志物已成为人们越来越关心的热点。Liew等学者提出所谓前哨原则(Sentinel Principle)，即外周血细胞存在独特的基因表达谱型，能反映人体组织稳定的(遗传)和动态的(环境和疾病的影响)的变化，外周血可以表达人体基因组80%以上的基因，其中包含组织特异性基因。这就提示我们可以通过检测外周血中表达谱芯片，可以筛选出具有诊 断价值的基因，并用实时荧光定量RT-PCR诊断甲状腺癌。 

近年来，广泛应用于诊断及人群筛选的主要方法是受试者工作特性曲线分析（ROC分析），美国生物统计百科全书中关于ROC分析的定义是:对于可能或将会存在混淆的两种条件或自然状态,需要试验者、专业诊断学工作者以及预测工作者作出精细判别,或者准确决策的一种定量方法。目前ROC分析已成为广泛应用于临床诊疗和人群筛检研究的一种统计方法。它结合灵敏度和特异度对诊断试验进行综合评价,根据曲线的形状和面积对诊断试验作定量分析，可选取最合适的截割点使试验的灵敏度和特异度达到最优。 

发明内容

本发明的目的是根据保守序列TP53INP1、TP53INP2和AXIN2基因设计了引物，提供一种特异性强，敏感性高，一种用于甲状腺乳头状癌早期诊断的试剂盒及检测方法和应用。 

本发明提供的用于甲状腺乳头状癌早期诊断的试剂盒的引物序列： 

TP53INP1 

Sense:5’-CTTAACAATGTTCCAGAGGCTGAAT-3’ 

Antisense:5’-AGGGTGCTCAGT AGGTGACTCTT-3’ 

TP53INP2 

Sense:5’-:5’-GGTCCGTGTTGCACCTAA-3’ 

Antisense:5’-TTGGATCCCACCATGGAGGGCGC-3’ 

AXIN2 

Sense:5’-5’-CACGGAAACTGTTGACAGTGGATAC-3’ 

Antisense:5’-GGTGGCTGGTGC AAAGACATAG-3’ 

GAPDH 

Sense:5’-GCACCGTC AAGGCTGAGAAC-3’ 

Antisense:5’-TGGTGA AGACGCCAGTGGA-3’ 

用于甲状腺乳头状癌早期诊断的试剂盒的检测方法包括以下步骤： 

A、常规方法提取待检样品RNA； 

B、将待检样品RNA反转录成cDNA； 

C、将上述引物分别与PCR混合液加入PCR反应管中混合后加入待检样品cDNA； 

D、放入荧光PCR检测仪中进行反应； 

E、有扩增曲线且待检样品经过标准品定量后得出的数值符合判断阈值为阳性，否则为阴性；