[发明专利]用于蛋白质化学修饰的PICTET-SPENGLER连接反应

说明书

相关申请的交叉引用

根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2012年11月16日提交的美国临时专利申请61/727,501的优先权，通过引用将所述申请的全部内容并入本文。

关于联邦政府在所赞助的研究或开发获得的发明中的权利的声明

本发明是在美国政府的支持下作出的，由国家卫生研究所资助，授权编号GM59907。美国政府在本发明中具有某些权利。

发明背景

引言

用于蛋白质修饰的反应方法学在数十年来一直是一个活跃的研究领域。早期的策略集中在原始氨基酸的全面修饰，提供了获得各种经修饰的产物的途径(Glazer AN(1970),“Specific Chemical Modification of Proteins”,Annu.Rev.Biochem.39(1):101-130)。然而，各种应用要求蛋白质的位点特异性修饰：生物物理学研究需要知道连接报道分子的位点(Michalet X、Weiss S、&M(2006),“Single-Molecule Fluorescence Studies of Protein Folding and Conformational Dynamics”,Chem.Rev.106(5):1785-1813)，制备蛋白质微阵列和功能材料需要在特定取向上的固定(Wong LS、Khan F、&Micklefield J(2009),“Selective Covalent Protein Immobilization:Strategies and Applications”,Chem.Rev.109(9):4025-4053)，以及蛋白质药物与聚(乙二醇)或细胞毒素分子的缀合，其中化学修饰的位点影响所得到的生物制品的药代动力学和治疗学性能(Shen B-Q.等人(2012),“Conjugation site modulates the in vivo stability and therapeutic activity of antibody-drug conjugates”,Nat.Biotechnol.30(2):184-189；Cho H等人(2011),“Optimized clinical performance of growth hormone with an expanded genetic code”,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 108(22):9060-9065)。因此，该领域近年来开发了用以实现蛋白质的位点特异性修饰的方法，通常涉及引入表现出生物正交反应性的非原始官能团(Sletten EM&Bertozzi CR(2009),“Bioorthogonal Chemistry:Fishing for Selectivity in a Sea of Functionality”,Angew.Chem.Int.Ed.48(38):6974-6998；Stephanopoulos N&Francis MB(2011),“Choosing an effective protein bioconjugation strategy”,Nat.Chem.Biol.7(12):876-884)。