[发明专利]用于生产b型流感嗜血杆菌抗原的方法

说明书

本发明涉及用于在工业规模上生产用于疫苗目的b型流感嗜血杆菌的荚膜多糖(PRP)的方法，根据所述方法，将b型流感嗜血杆菌(Hib)的菌株在培养基中培养，收获该培养上清液，处理该培养上清液以便从其提取荚膜多糖，所述培养基包含至少：–一种碳源，–原卟啉，–盐，–氨基酸，–NAD或NADH，–维生素，–pH调节手段，其特征在于所述培养基是在化学上确定的。

本发明涉及用于在工业规模上生产b型流感嗜血杆菌(Hib)的荚膜多糖的方法，根据所述方法，将Hib的菌株在特定培养基中培养，所述培养基的组成是在化学上进行定义的，且因此不包含任何复杂的氮源或碳源。

现有技术，具体而言申请W2009007641，描述了用于b型流感嗜血杆菌的改进培养基，其不包含任何来自动物源的要素，如当培养b型流感嗜血杆菌的目的在于产生将随后作为抗原引入疫苗组合物的荚膜多糖时所推荐。在该现有技术中描述的培养基中，用植物蛋白胨代替通常由动物蛋白胨组成的氮源。

此类培养基在药物产品的安全性方面而言代表了很大进展，特别是关于消除了疾病诸如牛海绵状脑炎传播的风险；因此，它们允许符合卫生监督机构的推荐。

然而，蛋白胨的组成可以根据所提供的批次而变化，这可以导致产生的细菌量和还有有用抗原的产量的变化，这是疫苗生产者试图通过改变在方法的实施过程中的某些参数来限制或校正的。然而，在药物产品的工业生产的背景下，期望能够具有可用的稳健方法，其需要在每次实施时尽可能少的改变，并且其在每个步骤的结果在批次间是可再现的。

此类方法还必须允许产率与工业盈利相容，在从细菌产生抗原的情况下，标准不仅仅是仅获得最大可能量的细菌，而且获得抗原滴度和产生的细菌量之间的最佳比率；其因此对于在向着产生荚膜多糖引导细菌的代谢的条件下培养的细菌是期望的。

为此，本发明的主题是用于在工业规模上生产意欲用于疫苗目的的b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b）的荚膜多糖(PRP)的方法，根据所述方法，将b型流感嗜血杆菌(Hib)的菌株在培养基中培养，收获该培养上清液，处理该培养上清液以便从其提取荚膜多糖，所述培养基包含至少：

– 一种碳源，

– 原卟啉，

– 盐，

– 氨基酸，

– NAD或NADH，

– 维生素，

– pH调节手段，

其特征在于所述培养基是在化学上确定的。

凭借本发明，通过能够具有稳健的工业方法，提高荚膜多糖的产率，而不必相应地增加生物量，由此使得可能相对于所生产的PRP量降低产生的脂多糖(LPS)的量。

此外，培养基组成中不存在蛋白降低了所需的消泡剂产品方面的需求，且简化了纯化步骤，这使得可能从培养上清液获得由荚膜多糖组成的抗原。

根据本发明，所述培养基包含pH调节手段。这些pH调节手段可以由缓冲盐和/或与用于将酸或碱添加至培养基的装置组合的pH测量装置组成。借助于pH的调节，产率可以进行优化。

根据一个实施方案，根据本发明的方法还在于将产生的PRP缀合至载体蛋白，诸如破伤风蛋白。

本发明的一个主题还是用于制备疫苗组合物的方法，根据所述方法：

- 通过于在化学上确定的培养基中培养Hib的菌株在工业规模上制备由荚膜多糖(PRP)组成的针对b型流感嗜血杆菌(Hib)的抗原，所述培养基的每种成分的性质和量是完全确定的，且包含至少：

– 一种碳源，

– 原卟啉，

– 盐，