[发明专利]用于生产b型流感嗜血杆菌抗原的方法

权利要求书

1.用于在工业规模上生产用于疫苗目的的b型流感嗜血杆菌的荚膜多糖(PRP)的方法，根据所述方法，将b型流感嗜血杆菌(Hib)的菌株在培养基中培养，收获该培养上清液，处理该培养上清液以便从其提取荚膜多糖，所述培养基包含至少：

– 一种碳源，

– 原卟啉，

– 盐，

– 氨基酸，

– NAD或NADH，

– 维生素，

– pH调节手段，和

– 锌，

其特征在于所述培养基中的每种成分的化学结构和量是完全确定的，且锌的浓度对应于2.5 - 80 mg/L ZnSO₄.7H₂O。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于所述培养基包含尿嘧啶或次黄嘌呤。

3.根据权利要求1的方法，其特征在于所述碳源包含以下至少一种：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘油、木糖、核糖、岩藻糖、唾液酸和乳酸盐。

4.根据权利要求1的方法，其特征在于所述pH调节手段由缓冲盐组成。

5.根据权利要求1的方法，其特征在于所述原卟啉是合成的原卟啉IX。

6.根据权利要求1的方法，其特征在于所述盐选自钾盐、镁盐、钠盐、钙盐、铁盐、锌盐、钴盐和锰盐。

7.根据权利要求1或6的方法，其特征在于所述盐选自：K₂HPO₄；KH₂PO₄；MgSO₄.7H₂O；Na₂HPO₄.12H₂O；NaH₂PO₄.2H₂O；CaCl₂.2H₂O；FeSO₄.7H₂O；ZnSO₄.7H₂O；CoCl₂. 6H₂O；MnSO₄.H₂O。

8.根据权利要求1的方法，其特征在于所述氨基酸选自以下一种或多种：

精氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、色氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸或等效物。

9.根据权利要求1的方法，其特征在于所述培养基至少包含精氨酸、丙氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。

10.根据权利要求8或9的方法，其特征在于用谷胱甘肽或半胱氨酸替代胱氨酸。

11.根据权利要求1或2的方法，其特征在于所述维生素选自：硫胺素、泛酸盐、生物素、核黄素和吡哆醇。

12.根据权利要求2的方法，其特征在于用瓜氨酸替代尿嘧啶。

13.根据权利要求8或9的方法，其特征在于用瓜氨酸替代精氨酸。

14.根据权利要求1或2的方法，其特征在于其还包括将获得的荚膜多糖缀合至载体蛋白的步骤。

15.根据权利要求14的方法，其特征在于所述载体蛋白是破伤风类毒素。

16.用于制备疫苗组合物的方法，所述方法包含根据权利要求1-13中任一项权利要求的方法制备荚膜多糖的步骤。