[发明专利]应用MALDI‑TOFF质谱分析法的侵染性真菌感染的体外诊断方法

权利要求书

1.选自多糖、寡糖和单糖的所关注的化合物在制备用于病原性真菌微生物引起的侵染性真菌感染的体外诊断的试剂盒中的用途，其中，所述试剂盒用于以下方法：

-提供由哺乳动物获得的并含有蛋白质和/或脂质和/或盐，和/或易于与所述的蛋白质和/或脂质和/或盐形成复合物的多糖和/或寡糖和/或单糖的生物液体样品；

-处理所述样品，用于提取所述多糖和/或寡糖和/或单糖；

-利用MALDI-TOF质谱分析法确定所提取的多糖、寡糖和/或单糖中是否存在来源于所述真菌微生物、且选自所述多糖、寡糖和单糖的至少一种所关注的化合物；

-推断如果所述样品中存在所关注的化合物，则所述的哺乳动物正遭受侵染性真菌感染，

其中，所述的所关注化合物是海藻糖，并且所述病源性真菌微生物是白色念珠菌。

2.权利要求1的用途，其中，为了从所述的生物样品提取所述的多糖和/或寡糖和/或单糖：

-通过沉淀/凝聚大多数所述蛋白质或所述脂质，分离包含于所述生物液体样品中的所述复合物；

-离心所述的样品，使上清与固相分离；

-回收上清；

-通过反向色谱法将包含于上清液中的所述多糖和/或寡糖和/或单糖与残余蛋白质和残余脂质分离，并且通过吸收色谱法使所述的多糖和/或寡糖和/或单糖与所述的盐分离。

3.权利要求2的用途，其中，为了解离所述的复合物，向所述样品中添加络合剂并且将所述的混合物加热至沸腾。

4.权利要求3的用途，其中所述络合剂是碱。

5.权利要求3的用途，其中所述络合剂是EDTA。

6.权利要求3的用途，其中将所述的混合物加热至100℃和140℃之间的温度。

7.权利要求3的用途，其中将所述的混合物加热至接近120℃的温度。

8.权利要求2-7任一项的用途，其中，先进行反向色谱法，之后进行吸收色谱法。

9.权利要求1的用途，其中，含疏水相的柱用于反向色谱法，含活性碳的柱用于吸收色谱法。

10.权利要求1的用途，其特征在于，所述的所关注化合物具有1000以下的m/z比率。

11.权利要求1的用途，其中，加入至少一种易于作用于所述多糖和/或寡糖的酶，和/或进行化学处理，以切断由于所述复合物的分解所产生的所述多糖和/或寡糖链，结果潜在地增加所述所关注化合物的量。

12.权利要求1的用途，其中，向所述样品中加入已知量的至少一种标准化合物，以便于将由所述给定的所关注化合物获得的信号与由所述标准化合物获得的信号相比较，由此确定所述样品中包含的所关注化合物的量。

13.权利要求12的用途，其中，确定来自给定的所关注化合物的信号的强度与遍在的内源信号的强度的比率，所述内源信号之前确定并可能特异于获取所述样品的生物液体的类型，由上述的结果可定量所述样品中包含的所关注化合物。

14.权利要求1的用途，其中，所述的生物液体选自：动脉或静脉血、血清、生殖器粘膜的液体、和呼吸道的液体。

15.权利要求1的用途，其中，所述的生物液体选自：来自支气管肺泡灌洗、支气管抽吸、气管抽吸、咳痰、唾液的液体、用于收集皮肤和体被部分的液体、渗漏液和来自闭腔的液体。

16.权利要求1的用途，其中，所述的生物液体选自：脑髓液、来自胃肠道或尿道的液体，以及来自研磨活检碎片的液体。

17.能用于上述任一权利要求的用途中的试剂盒，其中，所述的试剂盒包括：

-至少一种包含能实施反向色谱法的固体疏水相的起始支持物；

-至少一种第二容器，其包含进料口、输出口、以及在进料口和输出口之间的固体活性碳填充物；

所述试剂盒还包含给定量的标准化合物，所述的标准化合物是海藻糖。

18.权利要求17的试剂盒，其中，所述的填充物通过混合等量活性碳和硅藻土来制备。

19.权利要求17或18的试剂盒，其中，所述的疏水固相以相分离的形式存在并包含磁性材料。