[发明专利]用于核酸扩增的核酸有效
申请号: | 201380026175.3 | 申请日: | 2013-03-13 |
公开(公告)号: | CN104540958B | 公开(公告)日: | 2018-10-30 |
发明(设计)人: | P·麦德波谷;D·考芬博格;K·肖恩顿 | 申请(专利权)人: | 贝克顿·迪金森公司 |
主分类号: | C12P19/34 | 分类号: | C12P19/34 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 赵蓉民;陆惠中 |
地址: | 美国新*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 核酸 扩增 | ||
1.试剂盒,包括:
用于核酸扩增的分离的核酸模板,包括与SEQ ID NO:1或其反向互补序列具有至少约99%同一性的序列;
第一引物,包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5;和
第二引物,包括SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6。
2.权利要求1所述的试剂盒,其中所述的分离的核酸模板包括SEQ ID NO:1的序列或其反向互补序列。
3.权利要求1所述的试剂盒,其中所述的分离的核酸模板包括SEQ ID NO:8的序列或其反向互补序列。
4.权利要求1所述的试剂盒,其中所述第一引物包括SEQ ID NO:3,并且其中所述第二引物包括SEQ ID NO:4。
5.权利要求1所述的试剂盒,其中所述第一引物包括SEQ ID NO:5,并且其中所述第二引物包括SEQ ID NO:6。
6.权利要求1-5任一项所述的试剂盒,进一步包括寡核苷酸探针,所述寡核苷酸探针包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16。
7.权利要求1、2、4或5任一项所述的试剂盒,
其中所述的分离的核酸模板包括SEQ ID NO:1或其反向互补序列,
所述试剂盒进一步包括至少一种寡核苷酸探针,其中所述至少一种寡核苷酸探针包括SEQ ID NO:2。
8.定量样品中的核酸量的方法,所述方法包括:
提供一定量的多核苷酸,所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:1的序列具有至少约99%同一性的序列;
使所述多核苷酸接触正向引物和反向引物,其中所述正向引物包括SEQ ID NO:3和5中的至少一个,并且其中所述反向引物包括SEQ ID NO;4和6中的至少一个,
其中所述接触在标准PCR条件下发生,
延伸所述正向引物和反向引物,从而生成至少一种目标扩增子;和
检测与所述至少一种目标扩增子的数量成比例的信号。
9.权利要求8所述的方法,其中所述正向引物包括SEQ ID NO:3,并且所述反向引物包括SEQ ID NO:4。
10.权利要求8所述的方法,其中所述正向引物包括SEQ ID NO:5,并且所述反向引物包括SEQ ID NO:6。
11.权利要求8-10任一项所述的方法,其中检测与提供的扩增子的量成比例的信号包括使所述扩增子与单链寡核苷酸探针接触,所述单链寡核苷酸探针在标准PCR条件下、在至少50℃的温度下与所述扩增子退火。
12.权利要求11所述的方法,其中所述单链寡核苷酸探针包括SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:16。
13.权利要求11所述的方法,其中所述单链寡核苷酸探针进一步包括至少一种荧光团和至少一种猝灭剂。
14.权利要求12所述的方法,其中所述单链寡核苷酸探针进一步包括至少一种荧光团和至少一种猝灭剂。
15.权利要求8所述的方法,进一步包括,在从样品提取核酸前,使所述量的多核苷酸接触样品。
16.权利要求8所述的方法,其中延伸所述正向引物和反向引物包括下列中的至少一种:聚合酶链式反应(PCR)、链置换扩增(SDA)、环介导的等温扩增(LAMP)、连接酶链式反应(LCR)、免疫扩增、转录介导的扩增(TMA)、基于核酸序列的扩增(NASBA)、自持序列复制(3SR)和滚环扩增。
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