[发明专利]表达PH敏感性免疫球蛋白序列的非人动物

权利要求书

1.一种制备基因修饰的非人动物的方法，所述方法包括修饰所述非人动物使其在其种系中包括第一免疫球蛋白可变基因座，所述第一免疫球蛋白可变基因座包括未经重排的免疫球蛋白重链可变区核酸序列，所述未经重排的免疫球蛋白重链可变区核酸序列包括插入至少一个组氨酸密码子或用组氨酸密码子取代至少一个非组氨酸密码子，其中所述插入或取代的组氨酸密码子不由相应的野生型种系的未经重排的免疫球蛋白可变区核酸序列编码。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括修饰所述非人动物使其在其种系中包括第二免疫球蛋白可变基因座，所述第二免疫球蛋白可变基因座包括免疫球蛋白轻链可变区核酸序列，所述免疫球蛋白轻链可变区核酸序列包括插入至少一个组氨酸密码子或用组氨酸密码子取代至少一个非组氨酸密码子，其中所述插入或取代的组氨酸密码子不由相应的野生型种系的免疫球蛋白可变区核酸序列编码。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一免疫球蛋白可变基因座包括未经重排的重链可变区核酸序列的功能性部分，所述未经重排的重链可变区核酸序列的功能性部分包括未经重排的V_H、D_H和J_H基因区段和所述插入或取代的组氨酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述未经重排的V_H、D_H和J_H基因区段是未经重排的人源V_H、未经重排的人源D_H和未经重排的人源J_H基因区段。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述未经重排的V_H、D_H和J_H基因区段是至少一个未经重排的人源V_H基因区段、包含接头的合成的D区段和人源J_H基因区段。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述合成的D区段包括至少一个组氨酸密码子。

7.根据权利要求2所述的方法，其中所述第二免疫球蛋白可变基因座包括未经重排的轻链可变区核酸序列的功能性部分，所述未经重排的轻链可变区核酸序列的功能性部分包括未经重排的V_L和未经重排的J_L基因区段和所述插入或取代的组氨酸。

8.根据权利要求2所述的方法，其中所述第二免疫球蛋白可变基因座包括重排的免疫球蛋白轻链可变区核酸序列，所述重排的免疫球蛋白轻链可变区核酸序列包括与J_L基因区段重排的V_L基因区段和所述插入或取代的组氨酸。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述插入或取代的组氨酸密码子是在编码可变结构域的核酸序列中并且所述组氨酸密码子在选自下述的区域中：免疫球蛋白链的N-末端区、免疫球蛋白链的环4区、重链的CDR1、重链的CDR2、重链的CDR3、轻链的CDR1、轻链的CDR2、轻链的CDR3及以上区域的组合。

10.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一免疫球蛋白可变基因座或第二免疫球蛋白可变基因座中的至少一个可操作地与在内源性非人源免疫球蛋白基因座的内源性非人源恒定区核酸序列连接。

11.根据权利要求4所述的方法，其中所述未经重排的人源V_H、未经重排的人源D_H和未经重排的人源J_H基因区段可操作地与内源性非人源免疫球蛋白重链恒定区核酸序列连接。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述内源性非人源免疫球蛋白重链恒定区核酸序列在内源性非人源免疫球蛋白基因座中。

13.根据权利要求7所述的方法，其中所述未经重排的V_L和未经重排的J_L基因区段可操作地与内源性非人源免疫球蛋白轻链恒定区序列连接。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述内源性非人源免疫球蛋白轻链恒定区序列在内源性非人源免疫球蛋白基因座。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述可变区核酸序列包含2、3、4或5个组氨酸的簇，所述组氨酸的簇为组氨酸密码子对非组氨酸密码子的取代和/或组氨酸密码子的插入。