[发明专利]木霉属疏水蛋白制备

说明书

相关专利申请并以引用的方式并入

本专利申请要求提交于2012年5月21日的美国临时专利申请序列号61/649,654的优先权，并且所述专利申请以引用的方式全文并入本文。

引用以下专利申请：提交于2009年6月9日的国际专利申请序列号PCT/US2009/046783，其作为PCT公开No.WO 2009/152176公布于2009年12月17日；提交于2010年8月10日的国际专利申请序列号PCT/US2010/044964，其作为PCT公开No.WO 2011/019686公布于2011年2月17日；提交于2010年8月10日的国际专利申请序列号PCT/US2010/044964、提交于2012年3月29日的国际专利申请序列号PCT/US12/31104和提交于2012年4月16日的国际专利申请序列号PCT/US12/33728，以及提交于2012年3月28日的美国专利申请序列号13/433,036。

前述申请，以及其中引证的或者在它们审查过程中引证的所有文件(“申请引证文件”)以及申请引证文件中引证或者参考的所有文件，以及本文引证或者参考的所有文件(“本文引证文件”)以及本文引证文件中引证或者参考的所有文件，连同关于在本文中或者在以引用方式并入本文的任何文件中提到的任何产品的任何生产商说明书、描述、产品规格和产品单，都以引用方式并入本文，并且可应用于本发明的实施。更具体而言，所有参考文件被以引用方式并入至如同每一单独文件被具体且单独地指明以引用方式并入的程度。

技术领域

本发明涉及在木霉属(Trichoderma)生产宿主中产生疏水蛋白的方法。

发明背景

疏水蛋白(HBF)为具有约70至150个氨基酸的小的分泌蛋白，其存在于丝状真菌，例如裂褶菌(Schizophyllum commune)中。它们通常具有8个半胱氨酸残基。疏水蛋白可从天然资源中分离，但也可通过基因工程方法获得(参见例如，WO 2006/082251和WO 2006/131564)。

可将疏水蛋白以不溶于水的形式散布在多种真菌结构，诸如气生菌丝、孢子、子实体的表面上。用于疏水蛋白的基因可从子囊菌、半知菌和担子菌中分离。一些真菌具有不止一个疏水蛋白基因，例如裂褶菌、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)。不同的疏水蛋白显然涉及不同的真菌发育阶段。这里的疏水蛋白可能负责不同的功能(van Wetter et al.,2000,Mol.Microbiol.,36,201-210(van Wetter等人，2000年，《分子微生物学》，第36卷，第201-210页)；Kershaw et al.1998,Fungal Genet.Biol,1998,23,18-33(Kershaw等人，1998年,《真菌遗传生物学》，1998年，第23卷，第18-33页))。

迄今为止，确定的疏水蛋白通常被归类为I类或II类。两种类型都已在真菌中被确定为分泌蛋白，这种分泌蛋白在疏水界面处自组装成两性膜。I类疏水蛋白的聚集体一般相对不可溶，而II类疏水蛋白(HBF II)的聚集体易于溶解于多种溶剂。

就疏水蛋白的生物学功能而言，除了降低气生菌丝生成时水的表面张力，还描述了赋予孢子疏水性(Wosten et al.1999,Curr.Biol.,19,1985-88(Wosten等人，1999年，《当代生物学》，第19卷，第1985-1988页)；Bell et al.1992,Genes Dev.,6,2382-2394(Bell等人，1992年，《基因发展》，第6卷，第2382-2394页))。此外，疏水蛋白还用于划出地衣子实体中的气体通道，并充当植物表面真菌病原体识别系统中的组分(Lugones et al.1999,Mycol.Res.,103,635-640(Lugones等人，1999年，《真菌学研究》，第103卷，第635-640页)；Hamer&Talbot 1998,Curr.Opinion Microbiol.,volume 1,693-697(Hamer和Tablot，1998年，《微生物学新见》，第1卷，第693-697页))。