[发明专利]木霉属疏水蛋白制备

权利要求书

1.一种用于产生在诱导型启动子的控制下的基因编码的疏水蛋白的方法，包括以下步骤：

(a)生成第一混合物，其包含介于约5％至约75％之间的葡萄糖和纤维素酶制品；

(b)在某一温度下温育所述第一混合物并持续足够长的时间以产生诱导性进料组合物，所述组合物包含浓度在2g/L至25g/L范围内的槐糖、浓度在35g/L至60g/L范围内的龙胆二糖以及葡萄糖；以及

(c)用所述诱导性进料组合物培养宿主细胞，所述诱导性进料组合物的量能有效诱导疏水蛋白的产生，所述宿主细胞包含在槐糖-诱导型启动子或龙胆二糖-诱导型启动子的控制下编码疏水蛋白的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述产生的蛋白质为异源疏水蛋白。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述疏水蛋白为疏水蛋白I。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述疏水蛋白为疏水蛋白II。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞已被遗传工程改造以表达在槐糖-诱导型启动子或龙胆二糖-诱导型启动子的控制下的疏水蛋白基因。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述所关注的蛋白质在纤维素酶基因启动子的控制下。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述启动子是来自里氏木霉(Trichoderma reesei)的cbh1启动子。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述疏水蛋白基因在槐糖-诱导型启动子的控制下。

9.根据权利要求5所述的方法，其中所述所关注的蛋白质在龙胆二糖-诱导型启动子的控制下。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞为丝状真菌细胞。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述丝状真菌选自木霉属(Trichoderma)、腐质霉属(Humicola)、镰孢属(Fusarium)、曲霉属(Aspergillus)、脉孢菌属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、头孢霉属(Cephalosporium)、毁丝霉属(Myceliophthora)、嗜热真菌属(Thermomyces)、金孢子菌属(Chrysosporium)。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述丝状真菌为木霉属(Trichoderma)物种。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述丝状真菌为里氏木霉(Trichoderma reesei)。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一混合物中的所述纤维素酶制品包含约0.5g/L至约50g/L总蛋白。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第一混合物中的所述总蛋白浓度在约2g/L至约10g/L的范围内。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一混合物在约50℃至约70℃下温育。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述第一混合物温育8小时至7天之间。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述纤维素酶制品为里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶制品。

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一混合物在约50℃至约65℃的温度下温育两至三天。

20.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一混合物在约65℃的温度下温育两至三天。

21.根据权利要求1所述的方法，其中所述纤维素酶制品为已被工程改造以过表达β-葡糖苷酶的里氏木霉(Trichoderma reesei)的所述产品。

22.根据权利要求1所述的方法，其中所述纤维素酶制品为全部纤维素酶组合物或富集β-葡糖苷酶的纤维素酶组合物。

23.根据权利要求12所述的方法，其中编码一个或多个纤维素酶的一个或多个木霉属(Trichoderma)序列缺失或损坏。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述木霉属(Trichoderma)细胞进一步被修饰以损坏或缺失egl5基因。