[发明专利]工程化的抗体-干扰素突变体融合分子

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2012年3月3日提交的美国临时申请号61/634,565的优先权和权益，其对于所有目的以其整体通过引用并入本文。

政府支持声明

本发明用美国政府支持根据基金号1R43CA162762-01A1，由National Institutes of Health资助完成。美国政府在本发明中具有某些权利。

技术领域

本发明领域涉及基因工程融合分子，制备所述融合分子的方法，及其在抗肿瘤免疫疗法中的用途。

背景技术

干扰素是重要的细胞因子，其对免疫应答具有多种作用(Theofilopoulos等, Annu.Rev. Immunol., 23:307-336, 2005)。干扰素包括1型干扰素（例如，干扰素-α(IFN-α)和干扰素-β(IFN-β)）和2型干扰素（例如，干扰素-γ(IFN-γ)）。所有1型IFN由共同的受体(IFN-αR)识别，所述受体由两个跨膜蛋白IFN-αR1和IFN-αR2构成。已知IFN-α’s抑制血管发生(Sidky YA和EC Borden, Cancer Res., 47:5155, 1987)，介导树突细胞的刺激和分化(Santini等, J Exp Med, 191:1777, 2000)，并且对于抗原特异性CD8+ T细胞的体内增殖、扩展和长期存活是重要的(Tough DF等, Science, 272:1947, 1996)。尽管首先描述了它们抑制病毒复制的能力，但IFN-α’s具有多种特性，展示出抗增殖性作用，诱导凋亡(Rodriguez-Villanueva J和TJ McDonnell, Int J Cancer, 61:110, 1995)和诱导肿瘤细胞中的肿瘤抑制基因P53(Takaoka A等, Nature, 424:516, 2003)。因此，IFN-α’s是用于治疗多种癌症的第一重组蛋白。

不幸的是，使用IFN-α治疗癌症已受其半衰期短和伴随的全身性毒性而受限(Weiss K, Semin Oncol, 25:9, 1998; Jones GJ和Itri LM, Cancer, 57:1709, 2006)。由于IFN-α的体内半衰期短，所以需要频繁施用。药代动力学（PK）研究已显示仅0.01%的皮下注射的IFN-α到达靶肿瘤部位(Suzuki K等, Gene Ther., 10(9):765-773, 2003)。与IFN-α疗法相关的最常见的不利事件是流感样症状、疲劳、厌食、中枢神经系统和精神病反应，并且这些副作用中的一些可以变为剂量限制性的(Jones GJ和Itri LM, Cancer, 57:1709, 2006)。由于这些限制，因此难以在恶性疾病部位实现有效的IFN-α浓度而不引起全身性毒性。全身性IFN-α疗法的限制已导致探寻安全且有效地向肿瘤附近递送IFN-α的替代策略。

发明内容

在一方面，本发明提供新型基因工程肿瘤相关抗原(TAA)抗体(Ab)-干扰素α(IFN-α)突变体分子。

在一方面，本发明提供包含连接至IFN-α突变体分子的TAA Ab的基因工程融合分子，其中所述抗体直接连接至所述IFN-α突变体分子，其中所述融合分子相比于TAA Ab-野生型(wt)IFN-α融合分子显示出改进的PK特性。

在一方面，本发明提供包含连接至IFN-α突变体分子的TAA Ab的基因工程融合分子，其中所述抗体直接连接至所述IFN-α突变体分子，其中所述融合分子当与肿瘤细胞接触时导致杀伤所述肿瘤细胞或抑制其生长或增殖。

在本发明的多个实施方案中，基因工程融合分子的干扰素α突变体分子包含突变的人IFN-α2分子，其在SEQ ID NO: 13中包含至少一个突变，其中所述突变选自                                                ；及其组合。

在多个实施方案中，融合分子包含TAA抗体，其选自抗-HER2/neu、抗-HER3、抗-HER4、抗-CD4、抗-CD19、抗-CD20、抗-CD22、抗-CD25、抗-CD33、抗-CD138、抗-CD200、抗-CD276、抗-CXCR3、抗-CXCR5、抗-CCR3、抗-CCR4、抗-CCR9、抗-CRTH2、抗-PMCH和抗-内质蛋白抗体。