[发明专利]一种血小板标记物及其制备方法

权利要求书

1.一种血小板标记物，其特征在于：它是连接有血小板特异性抗体和荧光分子的2～6G PAMAM。

2.一种制备权利要求1所述血小板标记物的方法，其特征在于：其步骤如下：将2～6G PAMAM和血小板特异性抗体连接，再用荧光分子标记，即得连接了血小板特异性抗体和荧光分子的2～6G PAMAM。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述2～6G PAMAM由下述方法制备：

将PAMAM溶于甲醇中，加入甲醇钠，在氮气保护下逐滴加入丙烯酸甲酯，搅拌60～80h，蒸去甲醇和过量的丙烯酸甲酯，得到黄色油状液体，即为2～6G PAMAM；

其中，甲醇的用量为PAMAM的40～60倍（v/w），甲醇钠用量为PAMAM的0.06～0.08倍（v/w）；丙烯酸甲酯的总用量为PAMAM的2～2.3倍（v/w）。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述甲醇的用量为PAMAM的50倍（v/w），甲醇钠的用量为PAMAM的0.07倍（v/w）；丙烯酸甲酯的总用量为PAMAM的2.14倍（v/w）。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的血小板特异性抗体为抗CD41抗体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述抗CD41抗体为抗CD41单克隆抗体。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述2～6G PAMAM与血小板特异性抗体连接的方法为：

取2～6G PAMAM，加入（4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐）、血小板特异性抗体，反应1.5～2.5小时，去除剩余试剂，再加入N-乙基顺丁烯二酰亚胺，反应0.5～1.5h，超过滤净化，即可；

其中，2～6G PAMAM、（4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐）、血小板特异性抗体、N-乙基顺丁烯二酰亚胺与的用量比（v/w/w/w）为（30～50）：（0.18～0.20）：（0.003～0.005）：（0.18～0.20）。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

所述2～6G PAMAM、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐）与血小板特异性抗体的反应时间是2小时，加入N-乙基顺丁烯二酰亚胺后的反应时间是1h；

所述2～6G PAMAM、（4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐）、血小板特异性抗体、N-乙基顺丁烯二酰亚胺与的用量比（v/w/w/w）为40：0.192：0.004：0.192。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述荧光分子是波长680nm的近红外光染料。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述荧光分子标记的方法为：在2～6G PAMAM和血小板特异性抗体连接产物中，加入0.0005～0.0015倍重量（w/v）的荧光分子，暗光孵化0.5～1.5h，即可；

优选地，所述荧光分子的用量为2～6G PAMAM和血小板特异性抗体连接产物的0.001倍（w/v）；所述暗光孵化时间为1h。