[发明专利]五价轮状病毒疫苗抗原血清型的检测方法

权利要求书

1.用于RT-PCR检测五价轮状病毒疫苗抗原血清型的引物对，其特征在于，所述引物对选自引物对1～5中的至少一种：

引物对1：以轮状病毒G1血清型VP7基因为靶基因的引物对

上游引物5′-CTGTAGCATTATTTGCTTTGAC-3′

下游引物5′-CATATCTAATTCAAGACTTTGG-3′；

引物对2：以轮状病毒G2血清型VP7基因为靶基因的引物对

上游引物5′-TAACAGCACCATTTGTAAGG-3′

下游引物5′-ACAAACTTTTACCGTGCAGTC-3′；

引物对3：以轮状病毒G3血清型VP7基因为靶基因的引物对

上游引物5′-AGTTATACTGTCACCACTCCTT-3′

下游引物5′-TTTCCAGTTGCAGTGTAGCG-3′；

引物对4：以轮状病毒G4血清型VP7基因为靶基因的引物对

上游引物5′-ACTTAGATTCGTTTCTGGTGAG-3′

下游引物5′-TGCCAGTTTTTCGCTATCA-3′；

引物对5：以轮状病毒G9血清型VP7基因为靶基因的引物对

上游引物5′-CTCCTTTTGCTTATCGTCATTG-3′

下游引物5′-TACCACTAAGTTTTCACTTGCG-3′。

2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述引物对为引物对1～5。

3.含有权利要求1或2所述引物对的用于RT-PCR检测五价轮状病毒疫苗抗原血清型的试剂盒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、RNA逆转录酶、RNase抑制剂、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液中的至少一种。

5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。

6.五价轮状病毒疫苗抗原血清型的检测方法，其特征在于，其是利用权利要求1或2所述引物对，或权利要求3-5任一项所述试剂盒对待测五价轮状病毒疫苗抗原血清型进行RT-PCR检测。

7.根据权利要6所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取样品中的RNA；

2）以步骤1）中提取的RNA为模板，进行RT-PCR扩增反应；

3）分析扩增产物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，RT-PCR反应体系以50μL计为：

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，RT-PCR反应程序为：50℃反转录15min；94℃预变性2min；94℃变性5s，60℃退火30s，72℃延伸40s，共30个循环。