[发明专利]一种双试剂法测定尿酸含量试剂盒的配方

权利要求书

1.一种双试剂法测定尿酸含量试剂盒的配方，其特征在于：

(1)用尿酸酶和偶联过氧化物酶反应测定显色产物吸收确定尿酸量，用抗坏血酸氧化酶消除样品中抗坏血酸即维生素C的干扰；

(2)将抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶及辅助显色物质，加防腐剂和其它辅助成分配制在pH6.5～7.0的磷酸盐缓冲液中为试剂1；

(3)将尿酸酶和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐配制在pH8.0～9.6硼酸-硼砂缓冲液中，加防腐剂为试剂2；

(4)应用时，试剂1和试剂2混合的比例以最终反应体系pH在7.2～7.5之间为原则进行设置；试剂1和试剂2的pH不同时，其所含各种酶的初始浓度相应改变，使最终反应体系各种酶浓度变化小于10％即保持一致；试剂1和试剂2的pH在所述范围内变化时，二者在最终反应体系的混合比例如下表：

(5)应用时，加入样品体积占最终反应混合物总体积的1～3％；

(6)应用时，先将试剂1和样品混合，摄氏20～37度反应3到8分钟测定吸收为起点吸收；再加入满足最终pH要求的试剂2，混合后相同温度再反应5到15分钟；测定吸收并扣除起点吸收，得到尿酸氧化所生成过氧化氢被用于氧化显色底物所得产物吸收；

(7)以已知浓度尿酸为标准品，制备所得吸收对样品中尿酸浓度的响应曲线；据响应曲线和所测定的吸收推算样品中尿酸浓度。

2.据权利要求1所述一种双试剂法测定尿酸含量试剂盒的配方，此双试剂法测定尿酸含量试剂盒的制备特征在于：

(1)所需要的缓冲液都先灭菌，所用容器先灭菌并干燥；

(2)所需酶、显色底物、防腐剂作为主要有效成分，都配制成5倍以上高浓度储备液；酶溶液用0.22μm微孔滤膜过滤除菌；

(3)试剂1的缓冲液pH为6.5时，其所含主要有效成分浓度如下：辣根过氧化物酶>1.5U／ml，4-氨基安替比林0.25mM，抗坏血酸氧化酶>0.67U／ml，苯甲酸钠3.5mM；上述有效成分用50mM且pH为6.5的磷酸盐缓冲液即PBS配制成各自的储备液，再按储备液的浓度和所需最终浓度确定比例混合；

(4)试剂2的缓冲液pH为9.2时，其所含主要有效成分浓度如下：用在pH8.0～9.2间摄氏4度时失活半衰期长于6个月的尿酸酶时其浓度>2.0U／ml，2.33mM的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐以下简称为Toos，苯甲酸钠3.5mM；上述有效成分用50mM且pH为9.2的50mM硼酸-硼砂缓冲液配制成各自的储备液，再按储备液的浓度和所需最终浓度确定比例混合；

(5)当试剂1和试剂2的pH在权利要求1所述范围内变化时，二者在最终反应体系的混合比例变化后，调整试剂1和试剂2中酶初始浓度使得最终反应体系各种酶的活性与试剂1的pH为6.5而试剂2的pH为9.2时相比，相差小于10％即保持一致。

3.据权利要求1所述一种双试剂法测定尿酸含量试剂盒的配方，其应用特征在于：

(1)当设置试剂1的pH为6.5且试剂2的pH为9.2时，先取0.800mL试剂1和20μL样品混合，摄氏20～37℃反应5分钟；测定546nm吸收作为起点吸收；加入0.200mL试剂2在相同温度再反应5··20分钟，测定546nm吸收；扣除起点吸收为来自尿酸的显色产物吸收；用标准品测定546nm吸收对样品中尿酸浓度的响应作为标准曲线；通过标准曲线计算每个血清样品的尿酸浓度；

(2)试剂1和试剂2的pH不同于上述数值时，按权利要求1第(4)所述的比例混合试剂1和试剂2；用于自动分析仪时，样品、试剂1和试剂2的体积减少但维持相同的比例；

(3)该双试剂法测定尿酸含量的试剂盒在4℃避光保存。

4.据权利要求1所述一种双试剂法测定尿酸含量试剂盒的新配方，试剂1和试剂2所用缓冲液的pH不同且以保障其所含成本最高工具酶的稳定性最好为原则进行设置，应用时以最终反应混合物的pH达到7.2～7.5设置两种试剂混合的比例，故所用工具酶最佳稳定性所需pH决定试剂1和试剂2中所含各种酶的初始浓度。