[发明专利]角蛋白酶的酶活检测方法

权利要求书

1.角蛋白酶的酶活检测方法，包括下述的步骤：

（1）溶液配制

配制甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，使该缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH10.5；

配制方法：取甘氨酸溶液，先加水，再加入NaOH溶液调节至pH10.5，定容至100ml，室温保存两周；

配制乙酸-乙酸钠缓冲液，使该缓冲的浓度为0.01mol/L，pH5.2；

配制方法：取乙酸钠溶解于纯水中，用冰醋酸调节pH5.2，定容至250ml；

室温保存两周；

配制二硫苏糖醇溶液，使其浓度为1mol/L；

配制方法：取二硫苏糖醇固体，溶解于乙酸-乙酸钠缓冲液中，过滤除菌后分装于1.5ml离心管中，-20℃保存；

（2）检测

取底物天青角蛋白，剪成段，使其长度小于2mm；

反应体系如下：天青角蛋白3mg/ml，二硫苏糖醇0.01mol/L，用甘氨酸-氢氧化钠缓冲液将酶液稀释至1.5-3.0U/ml，空白管不加酶液；

将反应体系置于60℃水浴酶解1h，酶解液5000g离心10min，取上清，分别测定样品管和空白管在595nm处的吸光值A₁和A₀；

（3）分析

以样品管吸光值A₁比空白管A₀每上升0.1定义为一个酶活单位U， 计算公式如下：

X=(A₁- A₀)×10×n

n为酶液稀释倍数；

X为角蛋白酶的酶活。

2.如权利要求1所述的角蛋白酶的酶活检测方法，其特征在于，所述的二硫苏糖醇固体为分析纯。

3.如权利要求1所述的角蛋白酶的酶活检测方法，其特征在于，所述的步骤（1）中溶液配制具体为：

配制甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，使该缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH10.5；

配制方法：取0.2mol/L的甘氨酸溶液25ml，先加适量水，再加入0.2mol/L的NaOH溶液调节至pH10.5，定容至100ml，室温保存两周；

配制乙酸-乙酸钠缓冲液，使该缓冲的浓度为0.01mol/L，pH5.2；

配制方法：取0.205g乙酸钠溶解于约200ml纯水中，用冰醋酸调节pH5.2，定容至250ml；

室温保存两周；

配制二硫苏糖醇溶液，使其浓度为1mol/L；

配制方法：取3.09g二硫苏糖醇固体，溶解于20ml乙酸-乙酸钠缓冲液中，过滤除菌后分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。