[发明专利]一种快速检测五种β-地中海贫血突变的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于疾病检测产品领域，特别涉及一种快速检测五种β-地中海贫血突变的试剂盒及其应用。

背景技术

β-地中海贫血是由于β-珠蛋白基因突变导致β-珠蛋白肽链合成障碍为特征的遗传性溶血性贫血，为我国南方各省发病率最高、影响最大的遗传病之一。迄今为止，全世界已报道200多种β-珠蛋白基因突变，而我国也发现了30多种，其中-28、CD17、CDs41/42、CDs71/72、IVS-Ⅱ-654这五种突变占了我国β-珠蛋白基因突变的90%以上。β-地中海贫血患者根据β-珠蛋白链合成程度不同其临床轻重不一：轻型患者无症状或仅有轻度贫血，临床容易漏诊；中间型可有中度贫血，脾脏轻或中度大；重型患者表现为严重的慢性进行性贫血，需依靠输血和去铁治疗维持生命，致死性极高，预防还是最佳的应对措施，临床上主要通过对可疑β-地中海贫血患者进行基因诊断（包括产前诊断）来达到控制重型β-地中海贫血患儿出生的目的。

目前最常用的基因诊断方法是反向斑点杂交技术和DNA直接测序法。反向斑点杂交技术能够一次性检测β-珠蛋白基因的17个常见突变位点，但是该法耗时长，操作繁琐，检测结果受PCR反应体系、缓冲液、DNA纯度等因素影响，容易造成误诊甚至漏诊，而DNA直接测序法仪器试剂成本较高、检测周期长，对杂合突变、富集GC的样本很难一次检测获得准确数据，也有报道将TaqMan探针法、基因芯片技术应用于β-地中海贫血基因突变的检测，然而，这些技术操作复杂、实验需要精密仪器和特殊的标记引物、试剂耗材成本昂贵，在临床上无法普遍推广应用。

高分辨率熔解曲线(high resolution melting，HRM)是最近兴起的用于突变扫描和基因分型的技术，其基本原理为利用双链DNA受热解离成为单链的核酸物理特性，采集解链时释放的荧光信号绘制熔解曲线，再通过熔解曲线的变化来反映核酸性质的差异。HRM具有高灵敏度、特异性好、操作简单、完全闭管操作等优点，其检测不受突变碱基位点和种类的限制。

申请号为201210382305.4的中国专利公开了“HRM法检测突变型a-地中海贫血基因的试剂盒和方法”，该试剂盒可同时检测6种突变型a-地中海贫血，目前国内尚未有关于应用高分辨率熔解曲线（HRM）检测β-地中海贫血基因突变方面的专利报道。

发明内容

为克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种快速检测五种β-地中海贫血突变的试剂盒。所述五种β-地中海贫血突变指的是-28（c.-78A>G）、CD17（c.52A>T）、CDs41/42（c.126_129delCTTT）、CDs71/72（c.216_217insA）、IVS-Ⅱ-654（c.316_197C>T）。

本发明的另一目的在于提供应用上述试剂盒进行快速检测五种β-地中海贫血突变的方法。

本发明的再一目的在于提供所述试剂盒的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种快速检测五种β-地中海贫血突变的试剂盒，包括-28位点引物对、CDs41/42和CDs71/72位点引物对、CD17位点引物对和IVS-Ⅱ-654位点引物对：

-28位点引物对：

上游引物为：5’-CCAATCTACTCCCAGGAGCA-3’；

下游引物为：5’-ACTTCTCCTCAGGAGTCAGGT-3’；

CDs41/42和CDs71/72位点引物对：

上游引物为：5’-GAAGACTCTTGGGTTTCTGA-3’；

下游引物为：5’-AGAAAACATCAAGGGTCCCA-3’；

CD17位点引物对：

上游引物为：5’-AGACACCATGGTGCACCTGAC-3’；

下游引物为：5’-GGCAGAGAGAGTCAGTGCCTA-3’；

IVS-Ⅱ-654位点引物对：

上游引物为：5’-GTGTACACATATTGACCAAATCAGGGTA-3’；

下游引物为：5’-GGTAGCTGGATTGTAGCTGC-3’。