[发明专利]黑曲霉菌株及其孢子粉的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物制品领域，具体涉及一种黑曲霉菌株及其孢子粉的制备方法。

背景技术

人类生存与农业可持续性发展己成为各国农业发展的主题。现代农业(增施水肥、改良品种、集约化栽培、化学化、机械化)的高投入高产出的掠夺式运作方式已经说明是极其有害的。实践证明，将传统农业与现代化农业紧密结合才有利于人类生存和发展。自80年代美国人提出根际促生菌以来，某些根际微生物对作物的促进作用是可以肯定的，具体作用主要有4个方面：①影响作物根细胞的渗透性；②影响根际代谢活动；③微生物对根分泌物的吸收作用；④改变营养物质对植物的有效性。

无论是微生物间的相互作用，还是微生物对植物的作用都是通过各种酶类及代谢产物作为介质而起作用的。虽然各国科学工作者对根际促生菌的生物学和生态学已做了大量研究，但对促生菌通过何种介质对作物及病原菌发生作用，尚无确切研究。因此，深入研究根际促生菌代谢产物对作物的生物活性及其分子结构特点有着十分重要的意义。一方面可以明确根际促生菌的作用机制，另一方面对仿生合成及微生物基因工程改造都有着十分重要的意义。特别是正向调控菌剂的研制成功，在理论与实际上都将有重大突破。

发明内容

本发明的目的是提供一种黑曲霉菌株，该菌种能够促进作物的生长发育；本发明同时提供了黑曲霉菌株孢子粉的制备方法，简单易行，适合工业化生产。

本发明所述的黑曲霉菌株是曲霉属(Aspergillus)中的黑曲霉SDKYSW-2#，黑曲霉菌株已于2013年10月12日，保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，分类命名为黑曲霉(Aspergillusniger)，保藏号为CGMCC No.8327。

黑曲霉菌株是从大棚（沂源）苗圃土壤中采用土壤稀释分离法分离获得。

本发明所述的黑曲霉菌株的筛选方法，包括以下步骤：

一、土样采集：从土壤表层到15cm处取样200g，一个地点采几个样本，混合过粗筛，取25g作分离用；

二、黑曲霉的分离：

1、仪器：

高压蒸汽灭菌锅、烘干箱、培养箱、电子天平、搪瓷杯、烧杯、分装漏斗、试管、吸管(10ml)、吸尔球、玻璃棒、棉花、线绳、报纸、培养皿、三角瓶（100ml）、玻璃珠、移液器（1ml）、吸头、药勺、接种针、酒精灯。

2、药品：

可溶性淀粉，磷酸二氢钾，硫酸镁，硫酸亚铁，琼脂，蔗糖，黑曲霉。

3、黑曲霉分离培养基的制备：

可溶性淀粉10g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.1g，硫酸亚铁0.1g，琼脂10g，蔗糖10g，水500ml；将试剂称好，加水放入搪瓷杯中，电炉上加热溶解，用吸管(10ml)吸培养基10ml分装试管中，塞好棉塞，用纸包好灭菌，备用。

培养基制作：试剂→溶解→校正PH值→分装→加棉塞、包扎→灭菌（0.1P保温30分钟）→备用。

4、操作方法：

（1）准备工作：

将使用仪器培养皿、三角瓶、吸头（若干）、药勺、培养基、10ml试管等，用高压灭菌锅0.1p保压30分钟，灭菌备用。

三角瓶：装入100ml水加入玻璃珠（若干）。

10ml试管：装入9ml水，做好编号，塞好棉塞，8支，备用。

培养皿5个为一组，用报纸包好，6包30个。

1ml吸头，每个单独用报纸包好（若干）。

（2）菌样稀释分离：

将待分离的菌样在无菌条件下，用接种针取1-2环，放入三角瓶中，瓶内菌液约含孢子50-100万个/ml,充分振摇5分钟左右，使孢子个个分离混匀，备用。

在接种箱内按无菌操作要求，用移液器吸取1ml三角瓶内菌液放入1号管，再从1号管吸1ml放入2号管，以此类推，直至稀释至6号或7号试管内，要求每往试管吸一次换一次吸头，每毫升稀释液中约含孢子数5-10个之间。

取5号6号7号试管内菌液0.5毫升，放入培养皿中，每个稀释度做10个平板，将培养基（温度50℃）倒入培养皿中与菌液充分混匀，放平、冷却。

大约20分钟左右待培养皿内培养基凝固后取出，倒置放入培养箱内（30℃），培养4天后，即可在平皿培养基上观察到以每个孢子为同心圆而生长的菌落，菌落大且孢子密度厚来筛选优良的菌株。

注意事项：

本操作一定要在灭过菌的无菌接种箱内进行，并严格按无菌操作要求进行。