[发明专利]微小分子RNA-508-5p作为抗肿瘤标志物的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种内源性的非编码小RNAs的新用途，尤其涉及miR-508-5p在预防与治疗胃癌和肝癌疾病中作为新的肿瘤标志物以及抗肿瘤药物研制中的用途。

背景技术

胃癌是常见的危害人类健康的恶性肿瘤，其病死率居我国恶性肿瘤之首，迄今病因不明，临床治疗效果不佳；原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率逐年增长。因此开展胃癌、肝癌发病机制及临床治疗的研究是减轻其危害的根本途径。

MicroRNA(miRNA)是近年来发现的一类内源性非编码单链RNA，其长约为18～25个核苷酸。miRNA通过Watson-Crick碱基互补匹配原则，对靶mRNA进行降解或抑制翻译来调节蛋白的表达。据预测，人类约含有1000个miRNA，参与调控超过30％的蛋白编码基因，在生物体的生长、发育、分化等方面起着重要的作用。miRNA的异常表达，参与肿瘤的各种生物学过程，包括肿瘤细胞增殖、凋亡和迁徙、侵袭等。越来越多的证据表明，microRNA可作为一种癌基因或抑癌基因，参与调控多种癌症的发生和发展过程。依此推断，miRNA可作为一种癌基因或抑癌基因。

成熟的miRNA通过和其靶基因3’UTR结合，从而降解其靶mRNA或阻碍其靶mRNA的翻译。通过miRBase检索成熟miR-508-5p序列信息，TargetScan、miRanda等进行靶基因预测，miR-508-5p靶向抑制预测靶基因SKP2的表达。Skp2基因在各种人类恶性癌症中都是过表达的，包括大肠癌、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、以及胃癌等，并且预后较差。Skp2的大量表达可促进癌细胞的细胞周期进展，与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关。SKP2过表达与直肠癌放化疗治疗预后不良直接相关，成为高潜力的治疗靶点。

在众多的miRNA中，miR-508已经被研究证实在胃癌、肝癌、肾癌和卵巢浆液性癌中表达异常下调，并很可能参与肿瘤的进程，成为潜在的抑癌基因，而目前miR-508-5p在胃癌、肝癌等肿瘤细胞中的调控作用机制及对其增殖与凋亡进程影响的研究仍不清楚，因此，开发以miR-508-5p为策略的胃癌和肝癌疾病的预防、诊断和治疗的基础研究和抗肿瘤药物研究具有重要的意义和应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种微小分子RNA-508-5p(miR-508-5p)在预防与治疗胃癌和肝癌疾病及抗肿瘤药物中的作用，所述miR-508-5p的核苷酸序列如下所示：5’-UACUCCAGAGGGCGUCACUCAUG-3’。

本发明的研究基础：

1.免疫组化法显示Skp2蛋白在中低分化胃腺癌中明显高表达，而在正常胃粘膜中Skp2蛋白几乎不表达，并且其表达水平与胃癌临床病理特征呈正相关，与肿瘤大小，淋巴结转移，浸润深度，分化程度等临床病理特征密切相关。相反，通过qRT-PCR检测发现miR-508-5p在中低分化胃腺癌组织中表达水平相较于在正常胃粘膜中表达水平明显下调，并且随着病理分级越严重，表达量成逐级下调的正相关趋势，qRT-PCR检测结果和芯片数据结果一致。

2.本发明通过TargetScan、miRanda等预测软件对miR-508-5p进行靶基因预测，通过双荧光素酶验证了其对Skp2具有特异性靶向抑制作用。

3.本发明成功包装了含有miR-508-5p小颗粒的慢病毒上清，病毒滴度达到1x10⁷TU/ml。将计算好的浓缩病毒上清液侵染肿瘤细胞，构建细胞模型，通过western blot和相对定量qRT-PCR检测方法，同时证实了miR-508-5p过表达能够特异性明显抑制Skp2mRNA(P＜0.05)和蛋白表达水平。

4.本发明通过MTT、Hoechst染色和流式细胞术同时证明，miR-508-5p通过靶标Skp2的表达，下调其在肿瘤细胞高表达的水平，调控细胞周期，阻止细胞G1/S期转换而有效抑制细胞的增值，促进肿瘤细胞的凋亡。

5.本发明同时从划痕实验和transwell细胞迁移和侵袭实验，证实了miR-508-5P能有效抑制肿瘤细胞侵袭、水平迁移、垂直迁移和细胞自愈能力。

6.本发明表明microRNA在临床实践中有非常重要的意义，将成为新一代的肿瘤生物诊断标志物和用于肿瘤治疗的分子靶标。尤其是开辟了以miR-508-5p为主的肿瘤疾病全新靶标的研究，也为研制抗肿瘤新药开辟新的途径。

附图说明