[发明专利]间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白、其制备方法和用途

权利要求书

1.一种间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种用于间日疟原虫PvMSP1基因PCR扩增的特异性引物，其特征在于，其序列为：

上游：5′-AATGGGTCGCGGATCCgaccaagtaacaacgggagag-3′，如SEQ ID NO：3所示；

下游：5′-GGTGGTGGTGCTCGAGgctacagaaaactccctcaaagag-3′，如SEQ ID NO：4所示。

3.一种如权利要求1所述的间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）间日疟原虫PvMSP1基因序列扩增，PvMSP1基因扩增的具体序列如SEQ ID NO:2所示；

2）间日疟原虫PvMSP1重组质粒的构建和鉴定，采用的重组质粒载体为：pET-28a(+)载体；

3）将重组质粒转化于宿主细胞中，并在宿主细胞中表达，得到表达产物重组蛋白；

4）螯合的Ni-NTA树脂亲和层析纯化表达产物重组蛋白。

4.如权利要求3所述的间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤1）具体为：设计SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列或其互补链为引物，提取间日疟原虫总DNA，以其为模板进行PCR扩增。

5.如权利要求4所述的间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，所述的PCR扩增反应条件为98℃预变性2.0min；98℃变性20sec，55℃退火30sec，72℃延伸1.0min，35个循环；72℃延伸10min，最后保存于4℃。

6.如权利要求3所述的间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤2）具体为：将质粒载体pET-28a(+)经Xho I和BamH I双酶切，并回收纯化；根据步骤1）所得的PCR产物和质粒载体酶切片段的浓度进行In-Fusion连接，构建成PvMSP1编码基因原核表达的重组质粒pET-28a(+)-PvMSP1；将此重组质粒通过热激法转化入大肠杆菌DH5a感受态细胞，培养后涂布于含卡那霉素的LB琼脂平板上，随机挑取上述平板上的菌落，摇菌培养后，将菌液进行PCR鉴定及测序鉴定。

7.如权利要求3所述的间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤3）具体为：通过热激法将步骤2）测序无误后的pET-28a(+)-PvMSP1重组质粒分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS中，培养后涂布于含卡那霉素的LB琼脂平板上；随机挑取上述平板上的菌落，培养菌液至对数生长期，加入诱导剂继续培养；SDS-PAGE电泳鉴定诱导表达结果。

8.如权利要求3所述的间日疟原虫PvMSP1重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤4）具体为：取表达重组蛋白PvMSP1量较高的冻存菌液于含卡那霉素的液体培养基中，培养过夜之后，转种至同样含卡那霉素的液体培养基，培养菌液至对数生长期，加入诱导剂继续培养，最后收取菌体；在上述菌体中加入核酸裂解液裂解细菌，离心后保留上清与沉淀，由SDS-PAGE电泳鉴定结果；根据上述结果，用变性剂裂解所得沉淀，离心后用Ni-NTA亲和层析树脂进行纯化，SDS-PAGE检验纯化结果。

9.一种如权利要求1所述的重组抗原蛋白在制备间日疟诊断试剂盒中的应用。