[发明专利]一种烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于烟草抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种成功率高，重现性好，快速准确，检查监测便捷，无田间污染的烟草赤星病叶片抗病性鉴定方法。

背景技术

烟草赤星病是一种危害烟草生产的严重病害，常给我国各烟区的烟叶生产带来巨大的经济损失，使选育抗赤星病的烟草品种显得尤为重要，而快速、准确、可靠且简便易行的抗病性鉴定方法能够有效缩短育种进程。在现有的鉴定方法中，田间人工病圃法鉴定周期长，易受大田生长环境影响，使接种效果不稳定，在致病结果的定量分析上也存在一定问题。赤星病菌毒素鉴定法虽然具有处理快速和适用对象多样化的特点，却与烟草赤星病的实际发病历程并不完全相同，从而对鉴定结果的可靠性产生影响，此外，实际操作中毒素浓度的确定也需投入较多的人力物力。因此，开发一种成功率高，重现性好，快速准确，检查监测便捷，无田间污染，且成本较低的烟草赤星病叶片抗病性鉴定方法是一个亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种成功率高，重现性好，快速准确，检查检测便捷，无田间污染的烟草赤星病叶片抗病性鉴定方法。

本发明的目的是这样实现的：一种烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，包括烟叶溶液制备、病菌孢子培养、待鉴烟叶预处理及抗病性鉴定工序，具体包括：

A、烟叶溶液制备：将成熟期健康无病斑的烟叶消毒、晾干后，进行组织破碎，再用无菌水配成4~6%的烟叶溶液；

B、病菌孢子培养：将赤星病菌产生孢子的菌丝点接种于培养基平板上，在培养箱内24~26℃培养10~20天，产生孢子后用烟叶溶液将孢子洗下，继续静置培养7~9小时，促进孢子萌发，得到赤星病菌孢子悬浮液，其孢子浓度为1.5~2.5×10⁴个/ml，发芽率≥87%；

C、待鉴烟叶预处理：当需要鉴定抗病性的烟草品种的烟叶进入成熟期时进行采样，将烟叶消毒后，晾干表面溶液，再进行保湿处理；

D：抗病性鉴定：吸取赤星病菌孢子悬浮液10~15μl滴在烟叶上，每片烟叶滴10~16滴，然后将烟叶置于相对湿度≥90%，温度为24~26℃的保湿框架或人工气候箱内光照培养3~5天，待烟叶出现黄色侵染斑后，测量病斑直径，判定烟草品种其烟叶的抗病性。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明所述鉴定方法在室内即可进行，克服了田间人工病圃法由于大田自然条件复杂多样，影响发病的因素较多，难以精确操控和定量分析的缺点，无需大量实验面积即可顺利操作，提高鉴定结果准确性的同时，降低了鉴定成本，除了具有重现性好，快速准确，结论稳定可靠的优点外，还避免了由于人工接种造成的大田污染。

2、在赤星病菌孢子培养步骤，本发明所述鉴定方法在培养基的选择上兼顾了产孢量和萌发率两方面的要求。优选的PDA培养基、Czapek培养基产孢量大，萌发率高，配合多点接种法及适宜的培养环境设定，缩短了产孢周期，改善了产孢同步性和孢子质量稳定性，在提高鉴定效率的同时，兼顾了重现性及鉴定结果的可靠性。

3、本发明所述鉴定方法在制备赤星病菌孢子悬浮液时，加入了烟叶溶液以促进孢子萌发，烟叶溶液较普通的葡萄糖、蔗糖溶液含有更丰富的有利于病菌孢子发芽的营养物。所优选的初熟期烟叶感病性更强，能进一步促进病菌孢子的侵染，有效提高了鉴定、监测的效率。

4、本发明所述鉴定方法在消毒步骤采用的是次氯酸钠溶液和乙醇溶液复用的消毒工艺。所述的乙醇溶液在杀灭烟叶表面微生物的同时，还具有一定的抽提作用，有利于增强赤星病菌孢子悬浮液对烟叶的渗透性，因而具有诱导感病的功效，提高了鉴定实验的成功率。

5、在待鉴烟叶预处理步骤，本发明所述方法选用初熟期的烟叶作为鉴定样本，目的是为了在考虑菌悬液孢子浓度的基础上，通过准确控制菌悬液的滴加量，兼顾鉴定试验的致病率与病斑检测的便捷性，控制病害发展的严重度，从而有利于提高鉴定的准确性和成功率。

6、在接种后的观察、监测期间，本发明所述方法对鉴定环境的温度、湿度和光照条件等都进行了较精确的设定。各工艺参数尤其是温、湿度的协同作用，能明显加速赤星病菌孢子的萌发及其对叶面的侵染，进一步缩短了鉴定周期。

综上所述，本发明所述鉴定方法成功率高，重现性好，快速准确，检查监测便捷，无需大块试验面积即可实现，且不会产生由于人工接种造成的田间污染，具有较好的推广应用价值。

具体实施方式

下面对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换，本发明均落入本发明的保护范围。