[发明专利]一种烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法

权利要求书

1.一种烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于包括烟叶溶液制备、病菌孢子培养、待鉴烟叶预处理及抗病性鉴定工序，具体包括：

A、烟叶溶液制备：将成熟期健康无病斑的烟叶消毒、晾干后，进行组织破碎，再用无菌水配成4~6%的烟叶溶液；

B、病菌孢子培养：将赤星病菌产生孢子的菌丝点接种于培养基平板上，在培养箱内24~26℃培养10~20天，产生孢子后用烟叶溶液将孢子洗下，继续静置培养7~9小时，促进孢子萌发，得到赤星病菌孢子悬浮液，其孢子浓度为1.5~2.5×10⁴个/ml，发芽率≥87%；

C、待鉴烟叶预处理：当需要鉴定抗病性的烟草品种的烟叶进入成熟期时进行采样，将烟叶消毒后，晾干表面溶液，再进行保湿处理；

D：抗病性鉴定：吸取赤星病菌孢子悬浮液10~15μl滴在烟叶上，每片烟叶滴10~16滴，然后将烟叶置于相对湿度≥90%，温度为24~26℃的保湿框架或人工气候箱内光照培养3~5天，待烟叶出现黄色侵染斑后，测量病斑直径，判定烟草品种其烟叶的抗病性。

2.如权利要求1所述的烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于所述成熟期健康无病斑的烟叶为初熟期烟叶。

3.如权利要求1所述的烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于所述烟叶消毒指的是先将烟叶置于4~6%的次氯酸钠溶液中浸泡0.8~1.2min，清水漂净后再置于75%的乙醇溶液中，浸泡20~40s。

4.如权利要求1所述的烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于所述培养基可以为燕麦培养基、PDA培养基、Czapek培养基中的任一种。

5.如权利要求4所述的烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于所述培养基为PDA培养基或Czapek培养基中的任一种。

6.如权利要求1所述的烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于所述保湿处理指的是将烟叶置于具有保湿效果的器械内，并将加入营养液的消毒保湿材料包裹于叶柄上。

7.如权利要求6所述的烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于所述营养液可以为10%的霍氏营养液、100ppm的烟用复合肥液中的任一种。

8.如权利要求1所述的烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于所述吸取赤星病菌孢子悬浮液滴在烟叶上之后，将烟叶置于相对湿度为95%，温度为25℃的保湿框架或人工气候箱内光照培养4天。

9.如权利要求1~8任一项所述的烟草赤星病叶片抗病性的鉴定方法，其特征在于所述测量病斑直径，判定烟草品种其烟叶的抗病性指的是每次试验都必须加净叶黄作为抗病对照，G140作为感病对照，对参与鉴定的烟草品种的烟叶病斑直径测量后进行方差分析，与净叶黄差异不显著的烟草品种其叶片抗病性为抗病等级，与G140差异不显著的烟草品种其叶片抗病性为感病等级，介于净叶黄和G140之间的烟草品种其叶片抗病性为中抗或中感等级。