[发明专利]一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法

权利要求书

1.一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法，其特征在于：以瑞香狼毒药材95%乙醇（体积浓度，下同）提取物为原料，依次经正相硅胶柱层析、反相ODS柱层析初步分离富集，最后通过一步高效液相色谱制备，收集含各化合物的流份，分别直接减压浓缩至干即可获得纯度大于98%的6种化合物；它们分别为异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)-狼毒宁B、异狼毒宁B和异狼毒宁A。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

（1）正相硅胶柱层析：

取瑞香狼毒药材95%乙醇（体积浓度，下同）提取浸膏，以氯仿、甲醇中的一种或两种的混合液溶解，在不断搅拌下，加入与浸膏等质量的200～300目柱层析硅胶，拌样，常温下充分晾干；之后干法上样，常压下过200～300目硅胶柱，依次以氯仿、氯仿-甲醇100：1（体积比，下同）、氯仿-甲醇50：1、氯仿-甲醇20：1洗脱，收集氯仿-甲醇20：1流份，负压浓缩回收溶剂后，得一级粗分物；

（2）反相ODS柱层析：

将上述一级粗分物以甲醇溶解后，加入与一级粗分物等质量的粒径为40～50μm ODS柱层析填料拌样，常温下充分晾干并处理成粉状；之后干法上样，过40～50μm ODS层析柱（柱长40cm，内径8cm），中压泵加压，压力为5～10MPa，流量控制在50～100ml/min，依次以15%（体积浓度，下同）、30%、45%、60%、70%甲醇-水洗脱，收集70%甲醇-水流份，负压浓缩回收溶剂后，得二级粗分物；

（3）高效液相色谱制备：

将上述二级粗分物以DMSO溶解，配制成浓度为50～100mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；滤液采用柱长25-50cm、直径2-10cm的高效液相制备色谱柱进行分离，每次进样体积为0.5～2.5ml，以体积浓度70%～80%甲醇-水或45%～55%乙腈-水溶液为洗脱体系，流速控制在10～100ml/min，在线紫外检测，检测波长设定为295nm，分别收集含有化合物异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)-狼毒宁B、异狼毒宁B和异狼毒宁A的流份，负压干燥得6种粉末，即分别为纯度大于98%的化合物异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)-狼毒宁B、异狼毒宁B和异狼毒宁A纯品。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：第一步正相柱分离所采用的填料为200～300目柱层析硅胶，洗脱剂为体积比100：0～20:1的氯仿-甲醇溶液；第二步反相柱分离所采用的填料为40～50μm柱层析ODS，洗脱剂为体积浓度15%～70%的甲醇-水溶液。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：第三步高效液相制备过程采用的制备柱填料为C₁₈键合相填料，粒径为5～10μm。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：高效液相制备过程采用采用在线紫外检测，其检测波长优选295nm。