[发明专利]广州管圆线虫病早期检测的分子标记物及引物

说明书

技术领域

本专利属于生物学领域，涉及一种可作为早期广州管圆线虫病早期检测的分子标志物，以及所用引物及相关试剂盒。

背景技术

广州管圆线虫病又称嗜酸粒细胞增多性脑膜脑炎。是因吃了生的或不熟的含有广州管圆线虫幼虫的淡水螺肉而感染，幼虫寄生在中枢神经系统而致病。主要临床表现为脑膜炎、脊髓膜炎、脑炎或脊髓炎，末梢血和脑脊液内嗜酸性粒细胞数量增高，重型者可有持续性高颅压；有脑部定位性损坏造成的相应表现；  少数患者可致死或留有后遗症。广州管圆线虫病已被世界公认为新流行或者再流行的人兽共患寄生虫病，我国卫生部也在2003年将其列为新发传染病。确诊广州管圆线虫病需在病人脑脊液或者其他组织中找到虫体，但检出率只有百分之十左右。通常该病需要依靠临床症状、流行病学资料和免疫学进行综合诊断。目前实验室检查主要有以下几种途径：

一、血液常规检查： 白细胞总数正常或增加，嗜酸性粒细胞可有不同程度的增多。

二、脑脊液检查：脑脊液压力增高，白细胞数量及蛋白含量增加；嗜酸性粒细胞增多。糖、氯化物无明显变化。极少数病例可找见幼虫或成虫。

三、免疫学检查： 常用的方法为酶联免疫吸附试验，抗体阳性可做为辅助诊断。

四、病原学检查：从脑脊液、眼或其他寄生部位查见本虫幼虫或成虫，但阳性机率极小。

五、影像学检查： 头颅MRI表现多种多样，脑脊髓内多发长条形或结节强化病灶和软脑膜强化是主要的表现。

众所周知，广州管圆线虫病的免疫诊断最主要是用ELISA法检测病人血清中特异性抗体 (蛋白质水平)。而microRNA的变化早于蛋白质变化和临床症状的出现，因此适合于疾病的早期诊断。另外由于取材方便，血清或者脑脊液中的microRNA比组织的microRNA具有更好的应用前景。microRNA是一种长度 20 ～ 24nt 单链小分子 RNA，它广泛存在于各种真核细胞生物中 表达具时序性和组织特异性，在细胞生长、发育、分化、死亡等生物过程中起着重要的作用。microRNA释放进入外周循环的途径目前主要考虑有从受损细胞渗透入循环，形成微泡进入循环，由细胞分泌进入循环三种不同的途径。microRNA耐RNA酶降解，在血清或者脑脊液中可以长期稳定存在，煮沸、反复冻融、酸碱环境及长期保存等方法均不会损失。目前国外相关研究发现miR-1对于急性心肌梗塞有诊断价值；miR-15、miR-16可用于慢性淋巴细胞性白血病的诊断；Let-7对非小细胞肺癌有诊断意义；miR-134可作为肺栓塞的诊断标志物。

     miR-146a-5p是一种典型的多功能基因，由其下游基因介导，参与各种生理病理过程，如炎症，免疫及肿瘤的发生发展。 虽然microRNA在各种物种间有较高的保守性，即不同物种间的序列相似，但却不完全相同。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种虫源性的microRNA作为广州管圆线虫病早期诊断的分子标志物。

本发明的另一个目的在于提供用于检测广州管圆线虫病的引物。

本发明的目的之三在于提供检测所采用的引物及分子生物学方法。

首先，发明提供了一种与广州管圆线虫病检测相关的分子标记物，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

同时，发明提供了一种用于检测广州管圆线虫病的引物，其特征在于所述引物序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4所示。

如SEQ ID NO:1所示基因，或者如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4所示引物，可用于制备广州管圆线虫病检测试剂。

发明同时提供了一种广州管圆线虫病检测试剂盒，其特征在于含有如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4所示的引物。同时，该试剂盒其特征在于其扩增产物中还可含有aca-miR-146a-5p。