[发明专利]一种菌糠高温分解复合菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种快速有效的菌糠高温分解复合菌剂，其特征在于由菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacillus pallidus、菌株保藏号DSM2027，ATCC7954Geobacillus stearothermophilus、菌株保藏号DSM7064Brevibacillus thermoruber、菌株保藏号ATCC43739，DSM2910Clostridium stercorarium subsp.thermolacticum、菌株保藏号NCIB10682，ATCC27405Clostridium thermocellum、菌株保藏号DSM574，ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans、菌株保藏号DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius、菌株保藏号DSM24528Symbiobacterium thermophilum8株嗜热细菌按在复合菌剂中的细胞数含量分别为10%-20%、10%-20%、2%-5%、10%-15%、15%-20%、5%-10%、10%-15%、15%-20%的比例混合发酵所得的复合菌剂；

菌株在混合发酵中的细胞数含量的含义是指复合菌剂中各菌株细胞数占复合菌总细胞数的百分含量。

2.制备权利要求1所述的一种快速有效的菌糠高温分解复合菌剂的方法，其特征在于8株细菌各自培养好后进行复合菌发酵；具体步骤如下：

（1）8株细菌各自培养，其培养方法分别为：

菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacillus pallidus的培养，将由葡萄糖1.0g，蛋白胨7.5g，牛肉膏5.0g，酵母粉2.5g，酪蛋白氨基酸2.5g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至8.5；60℃避光静止培养48h；

菌株保藏号DSM2027，ATCC7954Geobacillus stearothermophilus的培养，将由氯化钠5.0g，牛肉膏10.0g，蛋白胨10.0g，蒸馏水1000.0mL组成的培养基，pH值调整：至7.2；60℃避光静止培养48h；

菌株保藏号DSM7064Brevibacillus thermoruber的培养，将由葡萄糖15.0g，酵母粉5.0g，二水氯化钙0.2g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.0；60℃避光静止培养48h；

菌株保藏号ATCC43739，DSM2910Clostridium stercorarium subsp.thermolacticum的培养，将由磷酸氢二钾0.3g，磷酸二氢钾0.2g，氯化铵0.5g，七水硫酸镁0.5g，二水氯化钙0.25g，氯化钠2.25g，七水硫酸亚铁0.002g，维生素溶液10.0ml，微量元素溶液1.0ml，酵母粉2.0g，酪蛋白胨2.0g，刃天青0.001g，碳酸氢钠0.85g，甲醇10.0ml，L-半胱氨酸盐酸盐一水合物0.3g，九水硫化钠0.3g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至6.8；在80%N₂+20%CO₂厌氧条件下，60℃黑暗静止培养72h；

所述维生素溶液为Biotin2.0mg，Folic acid2.0mg，Pyridoxine-HCl10.0mg，Thiamine-HCl·2H₂O5.0mg，Riboflavin5.0mg，Nicotinic acid5.0mg，D-Ca-pantothenate5.0mg，Vitamin B₁₂0.1mg，p-Aminobenzoic acid5.0mg，Lipoic acid5.0mg，加蒸馏水定容至1000.0ml的溶液；

所述微量元素溶液为7.7M HCl10.0ml，FeCl₂·4H₂O1.5g，ZnCl₂70.0mg，MnCl₂·4H₂O100.0mg，H₃BO₃6.0mg，CoCl₂·6H₂O190.0mg，CuCl₂·2H₂O2.0mg，NiCl₂·6H₂O24.0mg，Na₂MoO₄·2H₂O36.0mg，加蒸馏水定容至1000.0ml的溶液；

菌株保藏号NCIB10682，ATCC27405Clostridium thermocellum的培养，将由硫酸铵1.3g，六水氯化镁2.6g，磷酸二氢钾1.43g，磷酸氢二钾5.5g，二水氯化钙0.13g，β-磷酸甘油二钠四水合物6.00g，七水硫酸亚铁1.10mg，还原型谷胱甘肽0.25g，酵母粉4.5g，刃天青1.0mg，微晶纤维素10.0g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.2；在80%N₂+20%CO₂厌氧条件下，60℃黑暗静止培养72h；

菌株保藏号DSM574，ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans的培养，将由磷酸氢二钾0.5g，氯化铵1.0g，硫酸钠1.0g，二水氯化钙0.1g，七水硫酸镁2.0g，DL-乳酸钠2.0g，酵母粉1.0g，刃天青1.0mg，七水硫酸亚铁0.5g，巯基乙酸钠0.1g，抗坏血酸0.1g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.8；在80%N₂+20%CO₂厌氧条件下，60℃黑暗静止培养72h；

菌株保藏号DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius的培养，将由酪蛋白胨15.0g，大豆蛋白胨5.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，pH值调整至7.3；60℃黑暗静止培养48h；

菌株保藏号DSM24528Symbiobacterium thermophilum的培养，将由氯化钠5.0g，硝酸钠1.7g，酵母粉5.0g，蛋白胨10.0g，碳酸氢铵3.2g，蒸馏水1000.0ml组成的培养基，，pH值调整至7.8；在80%N₂+20%CO₂厌氧条件下，60℃黑暗静止培养72h；

（2）复合菌发酵

将经步骤（1）培养好的8株细菌按照比例混合均匀后即获得混合菌种原液，将相当于培养液体积5%的混合菌种原液接种于发酵培养液中，在60℃下黑暗静止培养5天，得复合菌液；

所述混合发酵培养液为：蛋白胨5.0g，酵母粉1.0g，碳酸钙3g，氯化钠5g，K₂HPO₄1g，MgSO₄·7H₂O0.35g，菌糠粉10g，蒸馏水1000.0mL，pH值为7.8，121℃灭菌20min；

所述8株细菌的混合比例为：菌株保藏号ATCC51176，DSM3670Aeribacillus pallidus、菌株保藏号DSM2027，ATCC7954Geobacillus stearothermophilus、菌株保藏号DSM7064Brevibacillus thermoruber、菌株保藏号ATCC43739，DSM2910Clostridium stercorarium subsp.thermolacticum、菌株保藏号NCIB10682，ATCC27405Clostridium thermocellum、菌株保藏号DSM574，ATCC19858Desulfotomaculum nigrificans、菌株保藏号DSM21625Geobacillus thermoglucosidasius、菌株保藏号DSM24528Symbiobacterium thermophilum在混合菌种中细胞数含量分别为10%-20%、10%-20%、2%-5%、10%-15%、15%-20%、5%-10%、10%-15%和15%-20%；

（3）细菌吸附载体的制备：将80℃烘干的菌糠粉碎后，过0.4mm筛子备用；

（4）复合菌吸附发酵：在步骤（3）的菌糠粉中加入占菌糠粉重量的0.2%蛋白胨、0.3%鱼粉、0.25%酵母粉和50%自来水，边搅拌边喷洒占菌糠粉重1%的，由步骤（2）所得的复合菌液，置于发酵罐内，60℃避光保温培养，每24小时均匀搅拌1次，每隔48小时重复喷洒同样的菌液，共喷洒3次，第3次喷洒菌液量为菌糠粉重的20%，喷洒后避光保温培养12小时，搅拌均匀后置于60℃烘干，当总体水分含量为20%时停止干燥，得复合菌剂制品。

3.根据权利要求2所述的制备的一种快速有效的菌糠高温分解复合菌剂的方法，其特征在于细菌吸附载体为木屑菌糠、棉籽壳菌糠、木屑棉籽壳菌糠、棉秆菌糠、玉米芯秸秆菌糠。