[发明专利]一种邻硝基苯甲酸降解酶的编码基因及其应用

说明书

技术领域

本发明属于酶基因工程及酶工程领域，涉及一种邻硝基苯甲酸降解酶的编码基因及其应用。

背景技术

随着我国化学工业的快速发展，有机合成所产三废(废水、废气、废渣)产生量呈逐年递增之势。上述三废中存在大量对生物体有毒害作用的物质，对环境造成了极为严重的污染和危害，威胁到人类和其它生物的安全和健康。其中，又以硝基芳香化合物的相关污染问题最为突出。

硝基芳香化合物广泛存在于自然界中，主要应用于染料、杀虫剂、炸药、农药、医药及其它化工产品的生产。随着工农业的迅速发展，进入到环境中的硝基芳香化合物日益增多，给人类赖以生存的生态环境造成了严重的污染。此外，由于硝基和苯环结构的存在，使得硝基芳香化合物比其它化合物更难于生物降解。如何减少和去除此类化合物对生态环境的危害，已成为全社会共同关注的热点问题。

邻硝基苯甲酸(2-NBA)是有机合成和制备染料、香料，润滑脂和润滑油的抗氧剂和金锈剂等的重要中间体，其工业需求量十分巨大。该物质对环境有危害，会对水体和大气造成污染，易在大气化学和大气物理变化中形成酸雨。当pH值降到5.0以下时，2-NBA会给动、植物造成严重危害，鱼的繁殖和发育会受到严重影响。此外，水体酸化还会导致水生生物的组成结构发生变化，耐酸的藻类、真菌增多，而有根植物、细菌和脊椎动物减少，有机物的分解率降低。如何高效、低成本，且环境友好的去除2-NBA颇具研究意义。

发明内容

本发明提供一种邻硝基苯甲酸降解酶的编码基因(基因nbaB)。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种邻硝基苯甲酸降解酶的编码基因(基因nbaB)，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

一种所述的编码基因所编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

一种扩增所述的编码基因的引物，其核苷酸序列分别为SEQ ID No.3和SEQ ID No.4。

含有本发明所述基因的重组载体。

含有本发明所述基因的重组菌。

含有以上任一所述基因的表达盒、转基因细胞系及重组菌均属于本发明的保护范围。

本发明从Pseudomonas sp.ONBA-17中克隆得到负责2-NBA代谢的基因片段——nbaB。本发明能够为2-NBA的降解提供有效的生物技术手段，对于2-NBA污染环境的修复具有重要意义。该菌是假单胞菌属(Pseudomonas sp.)的菌株ONBA-17，于2013年9月2日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCC No.8095。保藏单位的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，该菌的分类命名为假单胞菌Pseudomonas sp.。

附图说明

图1是Pseudomonas sp.ONBA-17总DNA(Genomic DNA)电泳检测图。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。

实施例1Pseudomonas sp.ONBA-17总DNA(Genomic DNA)的提取

1.1Pseudomonas sD.ONBA-17的扩大培养

在无菌操作环境下，将-70℃保存的Pseudomonas sp.ONBA-17以接种针挑取小块，放置、涂布于Luria-Bertani(LB)固体培养基之上。28℃，静置培养3d。挑选单菌落，经2次转接，观察发现平板上菌落形态一致(无杂菌)。这里所述的“平板”和Luria-Bertani(LB)固体/液体培养基等均为微生物研究/生产领域常见术语、培养基、技术和方法，具体参见《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克，等著.分子克隆实验指南(第三版)[M].黄培堂，等译.北京：科学出版社，2008)。下文中如无特别备注或说明，均为微生物研究常用技术、方法、培养基、试剂和药品，且均在《分子克隆实验指南》中有所记录。

1.2Pseudomonas sp.ONBA-17总DNA的提取