[发明专利]检测CYP4V2基因常见突变的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及基因检测领域，特别涉及用于检测BCD致病基因CYP4V2基因常见突变的试剂盒及其应用。

背景技术

结晶样视网膜色素变性（Bietti crystalline corneoretinal dystrophy，BCD）是一种以眼底散在分布结晶样小闪光点为特征的视网膜退行性改变，同时可有脉络膜血管硬化，进行性夜盲和视野缩小。结晶样视网膜色素变性（crystalline retinal degeneration)于1937年由Bietti首先报道，又名Bietti结晶样营养障碍（Bietti's crystalline dystrophy)。BCD的发病年龄一般在20～40岁，双眼病变大致对称，并同步发展，之后进行性视力丧失，部分患者50～60岁时可出现全盲。该病在我国和日本较多见，在欧美国家较少见，男性稍多于女性，男女之比约为4：3。

BCD是一种常染色体隐性遗传性疾病，其致病基因为CYP4V2，CYP4V2基因的纯合突变或双杂和突变会导致发病，而只有一个等位基因突变则是BCD的健康携带者，在我国汉族人群中CYP4V2基因致病突变的频率约为7/1000，群体患病率约为1/24000。

视力对人类的正常生产社会活动非常重要，目前我国盲人多达500多万，给经济社会造成了严重的负担。BCD是一种危害较大的致盲性疾病，发病年龄一般在20～40岁，因此BCD患者有较长的“窗口期”，因此对“窗口期”BCD患者的早期诊断和早期干预有重要意义。BCD是一种常染色体隐性遗传性疾病，一个等位基因突变虽是BCD的健康携带者，但两个携带者的婚配会使其子代BCD患病风险高达25%，因此，对CYP4V2基因致病突变携带者的筛查也显得非常重要。

基因诊断作为一种新型的诊断技术，具有敏感性好、特异性高等特点，在疾病尤其是遗传性疾病中的应用越来越广泛。新生儿视力基因筛查技术在世界各国广泛开展，通过此筛查可以早期发现新生儿期视力损害并进行早期干预，以避免新生患儿由于遗传病带来的视力障碍。BCD在欧美国家较少见，而多见于中国和日本，目前尚缺乏产业化、规范化的胎儿或新生儿BCD基因筛查技术，难以对BCD患儿做到早期诊断。BCD的致病基因为CYP4V2，定位于第4号染色体长臂，CYP4V2基因全长19kp，包含12个外显子，编码产物为525个氨基酸的蛋白质，该蛋白属于CYP450家族，在脂肪酸代谢中发挥重要作用。CYP4V2基因突变形式不一，特点各异。BCD致病基因CYP4V2高频突变的检测从原理上可对存在BCD发病风险的患者进行早期预警，结合其他眼科检查可以达到早期检测、治疗的目的。

发明内容

本发明的发明人通过110例BCD患者样本的研究，发现在中国汉族人群中，CYP4V2基因的众多致病突变中c.802-8_810del17insGC，c.992A>C和c.1091-2A>G三个突变最为常见，其中，所述的c.802-8_810del17insGC突变表示第6内含子末尾的8个核苷酸TCATACAG和第7外显子开始的9个核苷酸GTCATCGCT缺失并在缺失的位置插入两个个核苷酸GC，从而导致第7外显子缺失。所述的c.992A>C突变表示CYP4V2基因在第8外显子中的第992位编码碱基由A突变为C，从而导致其第331位编码氨基酸由组氨酸突变为脯氨酸。所述的c.1091-2A>G突变表示CYP4V2基因第8内含子倒数第2个碱基由A突变为G，引起剪切受体AG变为GG，从而导致第9外显子缺失。对BCD患者的突变筛查结合其它地区的统计资料显示，这三个突变的发生频率约为76%，是目前所发现的最常见的BCD突变位点；并且通过研究证明，CYP4V2基因三个高频排他性突变c.802-8_810del17insGC，c.992A>C和c.1091-2A>G与BCD密切相关，是中国BCD人群的重要高频突变，占总数的76%，可以作为早期分子标记来进行BCD的风险评估和基因预警。

有鉴于此，本发明提供了用于检测BCD致病基因CYP4V2基因的三个高频突变c.802-8_810del17insGC，c.992A>C和c.1091-2A>G的试剂盒，其检测结果特异性高，操作简单。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：