[发明专利]检测雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的引物、方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201310449527.8 | 申请日： | 2013-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN103525918A | 公开（公告）日： | 2014-01-22 |
| 发明（设计）人： | 葛蝉;陈奕磊;王淑一 | 申请（专利权）人： | 长沙艾迪康医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 410008 湖南省长沙市芙蓉区张公*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 雌激素 受体 基因 内含 ca 重复 序列 引物 方法 试剂盒 | ||
1.检测雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的引物，其特征在于：所述引物的序列为：
CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAA
CAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG。
2.如权利要求1所述的引物，其特征还在于，还包括测序引物，所述测序引物为：
CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAA
CAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG。
3.检测雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1) 取全血样本，加入红细胞裂解液，裂解红细胞；
(2) 加入核酸提取液，提取核酸；
(3) 加入PCR扩增反应液进行DNA扩增；PCR扩增的引物序列为：
CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAA
CAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG；
(4) 取PCR 扩增产物进行琼脂糖电泳，检测是否扩增成功，选取有目的条带的PCR扩增产物进行酶纯化反应；
(5) 采用Sanger测序法对酶纯化产物进行测序，检测出被检样本中雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的重复次数。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在对PCR扩增产物进行酶纯化反应时，分别用无水乙醇和75%乙醇洗脱。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤3的扩增反应条件为：95℃ 5分钟；98℃ 10秒、56℃ 20秒、68℃ 30秒，40个循环；68℃ 2分钟。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤4的酶纯化反应为：取扩增好的PCR产物加入酶纯化液中，反应条件为：37℃ 50分钟，95℃ 5分钟。
7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤5测序反应条件为：95℃ 4分钟，95℃15秒；50℃ 20秒；60℃ 2分钟，25个循环。
8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，Sanger测序的引物序列为：
CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAA
CAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG。
9.用于检测雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的试剂盒，包括核酸提取试剂、PCR扩增试剂、酶纯化试剂、测序反应试剂，其特征在于，用于扩增样本DNA的引物的序列为：
CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAA
CAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，还包括测序引物为：
CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAA
CAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG。
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