[发明专利]水飞蓟黄酮木脂素的去甲基衍生物及其制备方法和其用途

权利要求书

1.一种如式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物： 

2.权利要求1所述化合物、式Ⅲ所示化合物或式Ⅳ所示化合物的制备方法， 

包括下述步骤1）和2）： 

1）将含有式Ⅴ-式Ⅷ所示化合物的混合物加入培养基基础中；所述培养基基础为适合菌株Eubacterium limosum ZL-II CGMCC NO.6846生长或发酵的培养液； 

2）将含Eubacterium limosum ZL-II CGMCC NO.6846的菌液接种于步骤1）制备的培养基中，37℃培养48h即得。 

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述培养基基础具体为庖肉培养 基基础，其组成为：蛋白胨30.0g/L，牛肉粉5.0g/L，酵母5.0g/L，葡萄糖3.0g/L，磷酸二氢钾5.0g/L，可溶性淀粉2.0g/L，溶剂为水。 

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述含Eubacterium limosum ZL-II CGMCC NO.6846的菌液的制备方法为：取Eubacterium limosum ZL-II CGMCC NO.6846的冻存液室温融化，加入厌氧液体培养基中37℃培养24h，如此循环进行菌株的扩增。 

5.根据权利要求2-4任一所述的方法，其特征在于：所述含有式Ⅴ-式Ⅷ所示化合物的混合物具体为从菊科水飞蓟属植物水飞蓟Silybum marianum果实中采用甲醇提取的黄酮类化合物的混合物，该黄酮类化合物的混合物主要包括水飞蓟素，所述水飞蓟素包括水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭。 

6.根据权利要求2-5任一所述的方法，其特征在于：还包括分离纯化步骤；所述分离纯化步骤包括大孔吸附树脂XAD-2分离纯化过程、ODS中压色谱分离纯化过程和制备型高效液相色谱分离纯化过程。 

7.根据权利要求2-6任一所述的方法，其特征在于： 

所述大孔吸附树脂XAD-2分离纯化过程的条件为：将权利要求2中步骤2）所得的培养液进行如下操作，每24L的培养液，过滤得上清液，上样于XAD-2大孔吸附树脂柱，分别依次用去离子水、10%乙醇水溶液、30%乙醇水溶液、50%乙醇水溶液各6个柱体积和60%乙醇水溶液8个柱体积进行洗脱，收集60%乙醇洗脱液流分，去除溶剂得7.48g Fr.1；所述柱子填料为XAD-2大孔吸附树脂，1.7kg，粒度20-60目，平均表面积330m²/g，柱高×内径为450×90mm；所述柱体积具体指一个柱体积为1L；所述%指乙醇在乙醇水溶液中的体积百分数； 

所述ODS中压色谱分离纯化过程的条件为：将7.48g Fr.1与11.22g反相硅胶ODS拌样后干法上样，柱子体积为36×460mm，填料为ODS，粒径20-45μm，经ODS中压色谱甲醇-水系统洗脱分离，洗脱液的流速20ml/min，先以250ml40％甲醇水溶液洗脱，收集洗脱开始至第250ml的洗脱液，去除溶剂后获得100.3mg的Fr.1-1；再以45％甲醇水溶液洗脱，收集洗脱开始至第700ml初的洗脱液，去除溶剂后得325.3mg的Fr.1-2；再收集第700ml末至第1600ml末的洗脱液，去除溶剂后得776.3mg的Fr.1-3；所述%指甲醇在甲醇水溶液中的体积百分数； 

所述制备型高效液相色谱分离纯化过程的条件为：采用制备型高效液相色谱仪SHIMADZU LC-20A，制备柱Inertsil ODS-3column，柱高×内径为250×20mm，粒径5μm，以甲醇和0.1％甲酸水溶液的混合液作为洗脱缓冲液进行等度洗脱，分别纯化Fr.1-1、Fr.1-2和Fr.1-3，所述洗脱缓冲液中，甲醇体积百分含量为48%；所述0.1％甲酸水溶液中，甲酸的体积百分含量为0.1％；将100.3mg的Fr.1-1、325.3mg的Fr. 1-2和776.3mg的Fr.1-3分别用甲醇溶解为20.0mg/mL的制备母液，将母液分别进行高效液相色谱分离纯化；每次进样量1.0mL，流速10.0mL/min；针对Fr.1-1样品，收集保留时间为38～41min的流分，去除溶剂后得到43.2mg的式Ⅳ所示化合物；针对Fr.1-2样品，收集保留时间为45～53min的流分，去除溶剂后得到57.9mg的式Ⅲ所示化合物；针对Fr.1-3样品中，先收集保留时间为63～72min的流分，去除溶剂后得到61.5mg的式Ⅱ所示的化合物，再收集保留时间为75～78min的流分，去除溶剂后得到26.3mg的式Ⅰ所示的化合物。