[发明专利]一种海参多糖的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品化学分析领域，具体涉及一种海参多糖的检测方法。

背景技术

海参市场的开发已经初具规模，产品形式也多种多样，但是在海参指标成分（例如海参多糖）的检测上，尚没有统一、灵敏的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种针对海参多糖的检测方法。

本发明的海参多糖的检测方法包括如下步骤：

（1）制备海参供试液

称取2g液体样品或粉碎后的固体样品置于500ml的塑料离心管中，加入100ml去离子水，混合均匀，放入已恒温105℃的干燥箱中加热1h，取出冷却至室温后，加入0.2ml碱性蛋白酶，摇匀，室温下酶解1h，放入100℃水浴锅中，灭活酶10min后，12000r/min高速离心30min，将离心液全部倒入量器中量取体积，移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去离子水定容至刻度；

（2）制备海参多糖标准曲线

准确称取250mg天青Ⅰ溶于250ml去离子水中，溶解摇匀，得到1mg/ml的天青Ⅰ储备液，将天青Ⅰ储备液与去离子水按体积比1:29混合均匀，调节使其最大吸光度A=2.1～2.2，置于冰箱中冷藏保存，得到天青Ⅰ试液；

准确称取0.4mg海刺参粘多糖标准物质溶于2ml去离子水中，溶解摇匀，置于冰箱中冷藏保存，得到0.2mg/ml的标准试液；

在7个10ml试管中，分别加入标准试液0、5、10、20、30、40、50μl，将溶液体积不足50μl的试管补加入水，使每支试管中的溶液体积均为50μl，然后加入1ml天青Ⅰ试液，混匀立即测定其吸光度值，以空白50μl水加入1ml天青Ⅰ试液的吸光度为对照，平行做三组，取其算术平均值，以标准试液中海刺参粘多糖质量μg与其相应的吸光度做直线回归，得到标准曲线；

（3）测定试样

移取海参供试液50μl于试管中，加入1ml天青Ⅰ试液，混匀立即测定其吸光度值，以空白50μl水加入1ml天青Ⅰ试液的吸光度为对照，利用标准曲线方程计算出海参多糖相对应的质量数，再计算供试液中海参多糖的浓度。

本发明的原理如下：海参样品经酶解、离心分离后，酶解液用天青Ⅰ试剂染色，其吸光度（510nm）在一定浓度范围内与多糖质量成正比，以标准多糖溶液做对照，就可采用分光光度法测得供试品中多糖的含量。

本发明的方法灵敏、准确，可用在日常的产品监测中。

具体实施方式

下面结合实施例说明本发明，但本发明并不局限于这些实施例。

1.试剂与标准物质

⑴天青Ⅰ：生物染色剂

⑵标准物质：海刺参粘多糖

⑶天青Ⅰ储备液（1mg/ml）：称取天青Ⅰ250mg（准确至0.01mg）溶于250ml去离子水中，溶解摇匀，放入冰箱中冷藏保存。

⑷天青Ⅰ试液：天青Ⅰ储备液与去离子水按1:29（V/V）比例混合均匀，调节使其最大吸光度在A=2.1～2.2之间，置于冰箱中冷藏保存。

⑸标准试液（0.2mg/ml）：准确称取海刺参粘多糖标准物质0.4mg（准确至0.0001g）溶于2ml去离子水中，溶解后摇匀，置于冰箱中冷藏保存。

2.仪器

⑴紫外分光光度计（UV）

⑵比色皿：1mm×1cm或1cm×1cm

⑶试管：10ml

⑷分析天平：感量0.1mg、0.01mg

⑸微量定量针：100μl、50μl、25μl

⑹离心机：500ml最大转速为12000r/min

⑺水浴锅

⑻恒温干燥箱

3.试样制备

3.1将样品粉碎（液体除外），称取2g（精确至0.001g）置于500ml的塑料离心管中，加入100ml去离子水，混合均匀，放入已恒温105℃的干燥箱中加热1h。取出冷却至室温，加入0.2ml碱性蛋白酶，摇匀，室温下酶解1h，放入100℃水浴锅中，灭活酶10min后，12000r/min高速离心30min。将离心清液全部倒入量器中量取体积V。

3.2移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去离子水定容至刻度。

4.测定步骤

4.1标准曲线的制备