[发明专利]肺癌易感基因的单核苷酸多态性位点rs7975232的检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地，涉及人维生素D受体基因（VDR gene）的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点rs7975232及其与原发性支气管肺癌相关性的检测。本发明还涉及检测这个SNP位点的方法和试剂盒。

背景技术

研究显示，肺癌（lung cancer）是一种多因素、多基因疾病，由环境与遗传因素共同致病的常见而多发的恶性肿瘤，对人类健康造成了极大的影响。随着分子医学的发展，目前已经发现了大量的肺癌相关基因，但是肺癌的发病机制仍然不完全清楚，肺癌的早期诊断和预防问题仍然未能完全解决。肺癌是遗传因子和环境共同作用的结果，由于环境因素（如吸烟、大气污染）是可以控制和确认的，而对肺癌遗传学因素却是固定不变的。因此，对可变因素的控制，如对肺癌危险因素的预防，可以在一定程度上延缓和防止肺癌的发病，但是对固定不变的遗传因素的认识不足却在一定程度上严重影响着对肺癌发病、诊断和治疗。因此对肺癌遗传学的研究十分必要（Alberg AJ,Brock MV,Samet JM.Epidemiology of lung cancer:looking to the future[J].J Clin Oncol.2005;23:3175-3185）。

近年来，有关肺癌治疗的研究更多地集中在肺癌的治疗领域，在肺癌化疗、靶向治疗方面国内外已取得突飞猛进的发展。但是，这些手段并不能从根本上控制肺癌发病；目前对人类肺癌驱动基因的研究虽有一定进展，但仍十分有限。因此，从肺癌发病相关基因入手，研究肺癌发病机制是今后肺癌防治研究的主要方向之一，具有重要的研究价值和应用前景，如果通过调节内源性抑癌机制治疗肺癌，将会促进我国生物医疗技术的发展，并为我国每年节省巨大的医疗费用。

大量针对肺癌的基础研究显示，维生素D与抑制肿瘤细胞增殖、抗新生血管形成、抑制肿瘤转移、诱导细胞凋亡等多种机制相关。人类VDR基因定位于12q12-14，包含11个外显子。在人体代谢通路中，维生素D的活化形式1,25(OH)₂D₃通过与维生素D受体（VDR）结合而发挥生物学效应，因此VDR的表达决定了1,25(OH)₂D₃能否有效发挥作用，故VDR基因被认为可能与肺癌发病相关（李榕，韩宝惠.维生素D与肺癌[J].肿瘤，2010；30：443-446）。rs7975232位点是VDR基因常见的酶切位点，但与肺癌发病风险的相关性研究较少，没有证实rs7975232与肺癌发病风险具有相关性的报道。

综上所述，为了最终实现治疗肺癌，本领域迫切需要寻求原发性支气管肺癌易感基因，并开发检测原发性支气管肺癌易感基因的方法、试剂盒，以及相关的治疗药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测（包括早期诊断）肺癌易感基因单核苷酸多态性位点的方法及检测试剂盒。

本发明提供了一种肺癌易感性基因单核苷酸多态性位点的检测方法，即检测VDR基因rs7975232位点的基因型,rs7975232带有C基因型的个体肺癌的发病风险显著高于普通人群。

所述的rs7975232，位于VDR的启动子中（片段重叠群contig：NT_029419.12位置10382143C/A）其中，脱氧核糖核酸（DNA）序列编号：rs7975232位置基于SEQ ID NO：1/6；引物1基于SEQ ID NO：2/6；引物2基于SEQ ID NO：3/6；探针1基于SEQ ID NO：4/6；探针2基于SEQ ID NO：5/6；扩增产物基于SEQ ID NO：6/6。

具体而言，该方法包括步骤：（a）抽提样品的基因组DNA，扩增获得VDR基因启动子；(b)检测步骤（a）产物中单核苷酸多态性位点rs7975232的基因型。

所述的扩增VDR基因启动子的引物序列如SEQ ID NO2和SEQ ID NO3所示。

所述的检测rs7975232的基因型的探针序列如SEQ ID NO4和SEQ ID NO5所示。

上述方法中涉及的测序、扩增、抽提基因组DNA等技术均可采用本领域的常规操作方法。

本发明提供了一种检测肺癌易感基因的试剂盒，它含有与位点rs7975232结合的探针。

在本发明的一个实施例中，与位点rs7975232结合的探针的序列如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示。

上述试剂盒还可以包括特异性扩增VDR基因启动子中包含rs7975232位点的区域的引物。