[发明专利]黑青稞籽皮类黄酮及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分的提取工艺，特别是涉及一种黑青稞籽皮中主要活性成分类黄酮的提取方法及其在制备预防和治疗缺氧损伤（特别是心、脑缺氧损伤）药物中的应用。

背景技术

青稞(Hordeum vulgare ssp.vulgare)，又称裸大麦，是禾本科大麦属作物，在世界许多国家和地区作为主要粮食作物已有几千年历史。在西藏，青稞品种资源很丰富，不同颜色、不同形状的品种多达十几个，有时在同一地区能发现7-8个青稞品种。青稞分为白青稞、黑青稞、墨绿色青稞等种类，其中，黑青稞是西藏特有品种，喜马拉雅山北麓的山南地区措美县因气候、土壤特殊而盛产黑青稞，将其加工成糌粑后口感好，营养高，而且长期服用对治疗糖尿病、胃病等有明显的疗效，这是白青稞不具备的。

黑青稞富含膳食纤维、多种矿物质、维生素，能促进人体健康发育，所含的β-葡萄聚可预防结肠癌，有学者从黑青稞中提取花色素，而有关其中更丰富的类黄酮物质的相关研究至今未见报道。

随着食品科学的发展，黑色健康食品越来越受到人们的关注，黑色食品是指带天然黑色或紫红色的各种动植物食品，黑色食品的保健功能在我国古代的医学论著中有过许多论述：《本草纲目》中谈及黑米名为“粳谷奴”，具有滋养肝肾、健脾和胃、活血明目等功能，久食可延年益寿；在论述服黑豆时说它可“加气力、补虚损”、“又益阳道”；在《本经》上说到芝麻有“益气力、长肌肉、填髓脑”作用，对乌骨鸡、木耳、海带、香菇的健身评价也都很高。这些黑色健康食品所含有益于健康的成分黑色素成分就是类黄酮的一种。然而分析表明，更广泛的类黄酮具有保健功能，如抑制血小板凝固、预防血栓和心脏病、降血脂、抗癌、抗炎、保护视力、延缓衰老等。在黑青稞提取中，赵桃等介绍了一种黑青稞花色素的提取工艺（赵桃，马林，李嘉佳，杜静君，杨娟，杨凡，《食品研究与开发》2010年09期），以黑青稞为原料，考察提取溶剂、酸化剂、提取温度、提取时间、料液比、提取次数和籽粒粉碎度等7个单因素对其花色素提取率的影响，确定了青稞色素的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度50%，温度53℃，时间3h，此时最大提取率为108.33μg/g。然该研究需将黑青稞籽粒粉碎，工艺复杂且影响提取率，且仅停留在花色素提取层面，只适于粗提，提取物难以分离，不适于工业化生产。迄今为止，尚未得到黑青稞籽皮类黄酮物质的提取方法及其应用的相关报道。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种可工业化实施的从黑青稞籽皮中提取类黄酮的方法。

本发明一种黑青稞籽皮类黄酮的制备方法，将未经粉碎的黑青稞籽皮分别经乙醇粗提、絮凝剂纯化、乙酸乙酯萃取和富集，得到黑青稞籽皮类黄酮。

所述粗提，是将黑青稞籽皮加入浓度为20％-60％（体积百分比浓度）的乙醇中浸提，黑青稞籽皮与乙醇的质量/体积比为1：6-10(g:ml)，调pH值为2.0-5.0，40-60℃水浴2-5h，得到类黄酮粗提物的醇提液；优选粗提条件为乙醇浓度40％，pH2.0，水浴温度50℃，水浴时间3h。

所述絮凝剂为101絮凝剂；所述纯化为向乙醇粗提的醇提液中加入101絮凝剂，101絮凝剂的添加量为1％-2％（g/100ml），在40-60℃水浴下搅拌，然后在3000-5000r/min条件下离心，取上清液，减压回收，馏出物为类黄酮粗品。

具体的，该方法包括以下步骤：

1）粗提：将黑青稞籽皮加入浓度为20％-60％（体积百分比浓度）的乙醇中浸提，黑青稞籽皮与乙醇的质量/体积比为1：6-10(g:mL)，调pH值为2.0-5.0，40-60℃水浴2-5h，得到类黄酮粗提物的醇提液；

2）纯化：向类黄酮粗提物的醇提液中加入101絮凝剂，101絮凝剂的添加量为1％-2％（g/100ml），在40-60℃水浴下搅拌，然后在3000-5000r/min条件下离心，取上清液，减压回收，馏出物为类黄酮粗品；

3）萃取：用乙酸乙酯对类黄酮粗品进行萃取：先将类黄酮粗品与水按体积比1：5-1：10混合，得到类黄酮粗品水悬液，再将类黄酮粗品水悬液加入乙酸乙酯中，类黄酮粗品水悬液与乙酸乙酯的体积比为1：5-1：10，振荡充分，静置，常温过夜，减压回收，馏出物为类黄酮精制物，在-20℃至-70℃下低温干燥，得到类黄酮精制物粉末；

4）富集：类黄酮精制物粉末溶于去离子水中配成溶液用于上样，用SephadexLH-20柱进行梯度洗脱，洗脱液为不同浓度的乙醇水溶液，水与乙醇的体积比依次为100:0、90:10、50:50、0:100，将洗脱物真空干燥，得到黑青稞籽皮类黄酮。