[发明专利]添加多种发酵促进剂发酵生产天然β-胡萝卜素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生产β-胡萝卜素的方法，尤其是涉及一种添加多种发酵促进剂发酵生产天然β-胡萝卜素的方法。

背景技术

在现有的技术中，中国专利CN1331343A(申请号00116698.0，申请日2000年6月22号)公开了一种发酵法生产天然β-胡萝卜素的方法，该方法是将丝状真菌的正、负菌株接种在搅拌发酵罐中培养丝状真菌发酵制备β-胡萝卜素，对搅拌桨叶的改进提高了发酵液的传质性能，更适合菌体的生长，发酵水平可达2.0g/L，未对利用发酵促进剂提高发酵产量进行工作。

<无锡轻工大学学报>2003年V.22，No.3报道了“Mg²⁺对三孢布拉霉菌合成β-胡萝卜素的影响”，提出发酵48小时补加0.3g/L Mg²⁺，β-胡萝卜素产量为0.141g/L，而对比的β-胡萝卜素产量很低(仅为0.097g/L)。而在对比的β-胡萝卜素产量提高到0.305g/L时(添加Mg⁺²，和β-紫罗酮)时发酵产量仅提高到0.342g/L，增加的倍数远低于对比产量低的菌株，但未进行更多的发酵促进剂的组合研究，使发酵产量进一步提高，尤其是在对比产量进一步提高，即选用对比产量高的菌株时，其发酵增加的倍数将进一步减少。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种在发酵工序中添加多种发酵促进剂来提高发酵法生产天然β-胡萝卜素的产量，可为现有工业生产提供提高发酵产量的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

添加多种发酵促进剂发酵生产天然β-胡萝卜素的方法，该方法包括斜面培养、种子培养、发酵培养工序，

所述的斜面培养将丝状真菌三孢布拉霉(Blakeslea Trispora)接种在斜面培养基上，控制温度为26～28℃，培养48～96h；

所述的种子培养是将经斜面培养的三孢布拉霉接种到种子培养基上，调节pH6.5～7.5，培养16～24h；

所述的发酵培养是将经种子培养的三孢布拉霉接种到发酵培养基中，控制发酵培养的温度为26～28℃、培养120～168h；

在发酵培养时添加了发酵促进剂来提高发酵培养生产天然β-胡萝卜素的发酵水平，所述的发酵促进剂的组成成分为：镁盐0.1～0.5mmol/L，双氧水5～60μmol/L、表面活性剂0～11g/L、癸烷0.5～6v/v％、甲酸钠0.05～2mmol/L、柠檬酸钠0.05～2g/L，发酵促进剂在发酵培养工序中作为补充液加入。

所述的斜面培养基基质为去皮土豆，控制土豆与水的质量比为10～30∶80～130，煮沸10～25min后过滤，按质量比为1～4∶0.5～3∶1～4加入葡萄糖、蛋白胨，琼脂，再加入维生素B₁3～10ppm。

所述的种子培养采用的种子培养基为粕饼粉5～15wt％，玉米粉3～8wt％，维生素B₁3～10ppm。

所述的发酵培养采用的发酵培养基含有玉米淀粉5～8wt％、粕饼粉1.2～2.8wt％、植物油5.1～7.0wt％、磷酸二氢钾0.04～0.09wt％、维生素B₁3～10ppm、硫酸锰0.01～0.06wt％、非离子表面活性剂烷基酚聚氧乙烯醚0.05～0.20wt％。

所述的发酵促进剂中使用的镁盐为MgCl₂，所述的发酵促进剂中采用的表面活性剂为Span20。

能够采用发酵法生产天然β-胡萝卜素的微生物有多种，其中以三孢布拉霉菌(Blakeslea Trispora)的性能最优，是国际上公认的实现工业化生产天然β-胡萝卜素的好菌株。属于真菌界真菌门(Fungi)、毛霉目、笄霉科、布氏笄霉属、三孢布拉氏笄霉(B.Trispora Thaxter)，本发明所述的方法，是发酵生产天然β-胡萝卜素的菌株即为三孢布拉霉菌(Blakeslea Trispora)有正、负两种菌株，保藏于上海化工研究院菌种保藏处。

所述的丝状真菌三孢布拉霉分正、负两种菌株，分别接种到斜面培养基培养，然后将培养得到的丝状真菌三孢布拉霉正、负菌株按1∶1～1∶20的比例接入种子培养基中进行培养。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：